基因改造骨髓造血干细胞靶向抑制结直肠癌新生血管形成的实验研究-外科学专业论文.docxVIP

基因改造骨髓造血干细胞靶向抑制结直肠癌新生血管形成 基因改造骨髓造血干细胞靶向抑制结直肠癌新生血管形成 的实验研究 前言 结直肠癌是危害人类健康的常见恶性肿瘤，近年来其发病率呈现逐年上升的 趋势。在上海结直肠癌在男女两性恶性肿瘤的排名分别升高到了第2位和第3 位。由于结直肠癌早期没有特异性的症状和体征，而且到目前为止仍然缺乏简便 易行的早期诊断方法，加上疾病中某些病理类型发展较快，所以大多数的病例来 就诊的时候已经是中晚期。目前对于结直肠癌的治疗方法，主要包含手术、化疗、 放疗和中医中药治疗，而对于中晚期的结直肠癌，疗效一直不好，五年的生存率 徘徊在50％左右t11。 20世纪80年代，Folkman等人的研究已经表明：肿瘤组织的生长需要有充 足的血管供应，才能持续生长，因此肿瘤组织会刺激机体进行新的血管形成从而 提供足够的能量及供氧【2J。早期的新生肿瘤依靠弥散可以获得足够的营养物质和 氧气，当瘤体增大到2mm左右直径时候，单纯的弥散已经不足以提供足够的营 养物质及氧气了，这时候肿瘤细胞会在瘤体内低糖、低氧的压力下开始分泌促血 管形成的物质，通过促进内皮细胞增值，迁徙和组装，最终形成有功能的新生血 管，一旦新生血管形成后，肿瘤将加速生长pJ。肿瘤的新生血管形成(Tumor angiogenesis)在为肿瘤提供营养的同时，也为肿瘤的转移提供了可能的途径，因 此肿瘤血管形成是肿瘤的生长和转移中的一个重要环节。目前有一些研究提示新 生的血管形成在结直肠癌的生长、转移中具有重要意义，随着结直肠癌患者病程 的进展，患者血清中的血管生成因子水平也逐渐升高【4】，因此，抗肿瘤血管生成 就有可能成为结直肠癌治疗的一种新途径。设想如果能阻断肿瘤的血液供应，理 论上就可能抑制肿瘤的生长，使之长期保持在2mm以下的休眠状态【5】。为此， 许多作者进行了不懈的努力，试图寻找到抑制肿瘤血管形成的方法。 1997年，O’Reilly等作者从鼠血管内皮瘤细胞的培养上清液中分离出内皮抑 素(Endostatin，ES)[610研究显示ES可特异性抑制血管内皮细胞的增殖、移动， 促进血管内皮细胞的凋亡，阻断新生血管生长，破坏内皮细胞转化为血管结构， 从而显著抑制实验肿瘤生长【6，¨。ES的发现为肿瘤的治疗提供了一种新的手段。 但是重组ES体外极易失活，体内维持时间也极其短暂，因此直接给药的治疗方 法困难重重 01。而ES的实际临床应用也有困难，可能需要很大剂量也不一定 能达到治疗目的。因此如何维持ES的持续作用，如何特异性的将ES作用在指 定的新生血管形成部位成为研究的重点。在实验中发现采用基因转染的方法是解 应主决这一问题的良好途径。 应主 决这一问题的良好途径。 目前作为基因治疗的载体分为病毒和非病毒型两种类型。两者比较而言，病 毒的复制效率高，而且转染的效率也比较高。在肿瘤基因治疗中较为常用的病毒 载体包括转移质粒、腺病毒、慢病毒等多种载体，目前发现慢病毒载体是一种比 较好的载体【11I。 慢病毒是逆转录病毒科的一个亚科，它能感染感染诸多类型的细胞，而且能 将所携带的基因整合到相应细胞的基因组内，利用病毒所携带的调控元件，使得 目的基因得到表达。而且常规的逆转录病毒只能感染处于分裂期的细胞，而慢病 毒可以感染静止期的细胞，所以它具有感染分裂细胞和非分裂细胞的能力，转移 基因片段容量大，目的基因表达时间长，不容易诱发宿主免疫反应的优点，是一 种有效的感染细胞和进行基因治疗研究的工具。近来，有作者提出了肿瘤基因病 毒治疗(Gene．virus therapy)的新策略：将治疗基因插入肿瘤特异性增殖病毒的 基因组中，利用病毒本身在肿瘤细胞内特异性增殖及复制，使治疗基因在肿瘤细 胞内大量复制并表达相应产物，而在正常细胞内则不增殖【l 目的基因得到表达后，如何高效的在新生的血管区域起到相应的作用而不作 用于正常的细胞，势必要求能有相应的导向作用。通过检索基因功能发现，Tie2 基因是肿瘤血管形成时功能得到增强的基因【b】。进一步研究Tie2基因的功能， 结果发现在胚胎发育时期，Tie2基因可以促进内皮细胞的增生、迁徙和调节内皮 细胞组装形成新的血管，是胚胎时期血管发育的必须基因。而在成年哺乳动物中， Tie2基因表达沉默。只有在成年小鼠和成人的肿瘤组织周边血管形成的密集区， 才发现Tie2基因表达产物的热点区域Il 4|。因此，利用Tie2基因作为导向基因来 引导针对新生血管形成的肿瘤基因治疗成为可能。 干细胞治疗是近年来肿瘤研究的一项热点115j。在小鼠和成人骨髓中均有造血 干细胞(hematopoietic stem cell，HSC)的存在，HSC经过分化可以转变为血 液细胞和新生血管形成的内皮细胞，因此后者具有血管的增殖能力，直接参与了 新