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5 生物产品萃取技术 ?萃取 有机溶剂萃取 Questions A、protein萃取? B、胞内酶的萃取? 5.1 双水相萃取 1、 双水相基本原理(ATPS相图)(重点) 2、 蛋白质的分配平衡(熟悉) 3、 影响分配平衡因素(熟悉) 4、 Applications (了解) 双水相系统(aqueous two-phase systen, ATPS) 1、 ATPS相图 双节线(bi-nodal): 图中的曲线。 双节线以下的区域为均相区,以上的区域为两相区,即ATPS 。 系线(tie line): 双节线上两点的直线。 系线(tie line)反映的信息 A 杠杆规则:系线上各点均分为组成相同,而体积不同的上下相。两相体积近似服从杠杆规则。 B 性质差异:系线的长度是衡量两相间相对差别的尺度,系线越长,两相间的性质差别越大;反之则越小。 C 临界点(critical point):当系线长度趋于零时, 两相差别消失,任何溶质在两相中的分配系数均为1。如K点。 2、 蛋白质的分配平衡 普通双水相系统 影响分配的因素 3、 影响分配平衡因素(熟悉) 温度对分配系数的影响 4 Applications 双水相系统萃取酶的一般流程图 5.2 反胶团萃取 反胶团萃取技术(Reversed micellar extraction)是近年来发展起来的一种新型萃取分离技术,主要适合于蛋白质的提取和分离。 反胶团体系由水、有机相及表面活性剂组成,是表面活性剂分散于连续有机相中自发形成的一种具有微水池结构的油包水微乳液。 反胶团萃取的原理 静电引力:主要是蛋白质的表面电荷与反胶束内表面电荷(离子型表面活性剂)之间的静电引力作用。 空间位阻作用:增大反胶束极性核的尺寸,以减小大分子蛋白进入胶核的传质阻力。 凡是能够引起静电引力,能够促使反胶束尺寸增大的因素均有利于提高分配系数。 这些因素主要是pH、离子强度、表面活性剂种类和浓度等,通过因素优化,实现选择性地萃取和反萃取。 反胶团萃取的优点 在反胶束内部包含了水溶液,蛋白质等生物分子萃取后进入反胶团内部的“水池” 中,避免了与有机溶剂直接接触,反胶束内的微环境与生物膜内相似,故能很好保持其生物活性,解决了蛋白质在有机溶剂中容易变性失活和难溶于有机溶剂的问题,为蛋白质的提取和分离开辟了一条新的途径。 成本低,有机溶剂可反复使用;容易放大和实现连续操作。 反胶束萃取是一条具有工业发展前景的蛋白质分离技术。 反胶团萃取的操作 A 萃取的基本方法 B 反萃取 . 5.3 超临界流体萃取 超临界流体 每一种物质都有其特征的临界参数,在压力--温度相图上,称其为临界点。临界点对应的压力称为临界压力,用PC表示,对应的温度称为临界温度,用TC表示。不同的物质有不同的临界点。临界点是气体和液体转化的极限,饱和液体和饱和气体的差别消失。 当温度和压力超过临界点值时,物质处于既不是液体也不是气体的超临界状态,称其为超临界流体。 超临界萃取原理 超临界C02的萃取特性(熟悉) (1)溶解特性 超临界C02是一种非极性流体,符合相似相溶的原理。其溶解力随物质极性的减弱而增大,随物质分子量的增大而减弱。一般地表现为,对分子量小,极性弱的物质易溶解,对分子量较大,极性较强的物质难溶解,对分子量高,强极性的物质,如氨基酸、蛋白质、糖和无机盐等则不溶解。在实际应用中,有时根据需要向超临界C02中加入助溶剂,来调整其溶解力。 (2)溶解力与P.T的关系 (P83) 超临界CO2的溶解力受P和T的影响较大。压力P增加,超临界C02的密度增加,溶解力也相应增加,其实验的结果也是如此。以超临界CO2 萃取沙棘油为例,T=39℃,P=15MP时,油的收率为88.0%,同样温度下,增加压力P=25MPa时,油的收率增加到90.7%。但一般当压力在40MP时,超临界CO2 的溶解力就达到了实际所能获得的最高限。 因为若再升高压力,萃取收率的提高,相对于为获得及保持这样高的压力所增的投资和操作费用来说就不经济了。 温度T升高,一般情况下CO2的溶解力有所增加,且较压力影响明显。仍以超临界CO2 萃取沙棘油为例。F=30MPa,T=32℃时,沙棘油的收率为90.1%,当温度升高T=40℃,油的收率提高到92.1%.但温度的升高受到对所萃取物质热敏性要求的限制。 (3)助溶剂(夹带剂)对溶解力的影响 (P84) 向超临界CO2流体中加入一定量的水、甲醇、乙酸、醋酸乙酯等物质或者是它们的混合物,可以增加溶解力,从而改变对所萃取物质的选择性。如在超临界CO2流体中加入总体积50~60%的甲醇后,即可以从浓度
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