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活、活、死细胞活力死细胞活力/毒性检测试剂盒毒性检测试剂盒
活活、、死细胞活力死细胞活力毒性检测试剂盒毒性检测试剂盒
Live Dead Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal Cells
说明书修订日期说明书修订日期：：2015.07.13
说明书修订日期说明书修订日期：：
Cat number：KGAF001
Store at -20℃ for 6 months, protected from light
For Research Use Only （科研专用）
一、一、试剂盒说明试剂盒说明
一一、、试剂盒说明试剂盒说明
简介：本试剂盒为动物细胞死活检测提供了双色荧光染色方法。本试剂盒采用两种广泛常用的荧光探针，通过检测细胞内酯酶活性和
质膜完整性两个方面反映细胞活力。本试剂盒适用于荧光显微镜、荧光多孔板、扫描仪、流式细胞仪以及其他荧光检测系统。本试剂
盒可以应用于大多数的真核哺乳动物细胞，包括贴壁细胞核某些组织，但不适用与细菌、酵母。该方法更快捷安全且灵敏度更高。
原理：在钙黄素AM 存在活细胞内时，其特点就是由于胞内无所不在的酯酶活性作用，由几乎无荧光、具有细胞膜透性的钙黄素AM
生成具有强烈荧光信号的绿色荧光物质 （Ex/Em：495nm/520nm ）。而对于受损的细胞膜来说，碘化丙啶(PI)可以传过进入细胞，与
核酸结合，荧光信号从而放大40 倍，产生一个明亮的红色荧光信号的死细胞 （Ex/Em：530nm/620nm ）。
一、一、 试剂盒组份试剂盒组份
一一、、试剂盒组份试剂盒组份
组组 份份 Cat: KGAF001 （（1000 T）） 储存储存条件条件
组组 份份 （（ ）） 储存储存条件条件
组份A ：Calcein AM 4mM in 无水DMSO，100µL -20℃，避光
组份B：PI 16mM in DMSO，100µL -20℃，避光
二、二、 操作说明操作说明
二二、、操作说明操作说明
1、荧光显微镜操作、荧光显微镜操作
、、荧光显微镜操作荧光显微镜操作
制备工作液制备工作液(2 µM calcein AM, 8 µM PI)
制备工作液制备工作液
钙黄素AM 和 PI 的浓度选择依据所用的细胞类型不同而有区别，应当根据具体细胞调节染料浓度以得到最佳效果。一般来说，满足
信号足够的前提下，尽可能选择最低浓度的染料剂量。钙黄素AM 和PI 推荐浓度范围为0.1~10µM。
1.1 取出钙黄素AM 和PI 试剂原液，室温平衡30 分钟。
1.2 加入5µL 16mM 的PI 储液至10mL 的PBS 中，涡旋震荡混匀，得到8µM 的PI 溶液。
1.3 将5µL 4mM 的钙黄素AM 储液加入到10mL 的PI 溶液中，涡旋混匀，确保充分混匀。
1.4 所得到的的工作液 （2µM 钙黄素AM 和8µM PI ）可直接用于染色细胞。
注意：钙黄素AM 的水溶液容易发生水解，应当当天用
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