几种新型分子标记技术在中国香菇种质资源遗传多样性研究中的应用-微生物学专业论文.docxVIP

华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 各 如需保密，解密时间 年 月 日 是否保密 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究r作及取得的研究 成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位 或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究 所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。 研牲鲐坳 帆伽罗年／土月如 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照 学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电 子版，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、 汇编学位论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学 位论文的全部或部分内容，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力。 注：保密学位论文(即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的 论文)在解密后适用于本授权书． 溯黼鲐瓷物 色型鸪 签名日期枷了年，。月砌 签名日期：p夕年·。月钞拥 几种新型分子标记技术在中国香菇种质资源遗传多样性研究中的应用目 几种新型分子标记技术在中国香菇种质资源遗传多样性研究中的应用 目 录 摘 要 l ABSTRACT 4 缩略词表 ．8 第1章文献综述 10 1．1香菇研究概述 ．1 O 1．1．1生物学特性 1 0 1．1．2食药用功效 lO 1．1．3遗传育种进展 11 1．2分子标记技术的类型及其在食用菌研究中的应用 ．．12 1．2．1分子标记的类型 13 1．2．1．1基于分子杂交技术的分子标记 ．．13 1．2．1．2基于PCR技术的分子标记 14 1．2．1．3限制性酶切和PCR结合的分子标记 ．．23 1．2．1．4基于单个核苷酸多态性的DNA标记 24 1．2．2分子标记技术在食用菌研究中的应用 26 1．2．2．1菌株遗传多样性和亲缘关系分析 ．26 1．2．2．2种质资源评价及菌株鉴定 一28 1．2．2．3杂交亲本选择及杂交子鉴定 ．．29 1．2．2．4基因克隆 ．30 1．2．2．5遗传图谱构建和基因定位 ．31 1．2．2．6线粒体遗传研究 ．32 1．3本研究的目的和意义 ．33 第2章香菇SSR标记的开发及SSR．PCR技术体系的优化 35 2．1引言 35 2．2材料与方法 ．．35 2．2．1试验材料 35 2．2．1．1供试香菇菌株 ．35 2．2．1．2供试培养基 ．35 2．2．2试验试剂 ．37 2．2．2．1贮存液 ．37 2．2．2．2 DNA提取液 ．37 2．2．2．3大肠杆菌感受态细胞的制备试剂 ．．38 2．2．2．4质粒提取试剂 ．．38 2．2．3试验方法 38 2．2．3．1香菇基因组DNA的提取 38 2．2．3．2 PCR产物纯化回收 ．．39 2．2．3．3克隆与测序 ．．39 2．2．3．4 ISSR．PCR扩增 ．．4l 2．2．3．5 ISSR．抑制PCR法开发香菇微卫星标记 41 2．2．3．6数据库法开发香菇微卫星标记 ．42 2．2．3．7 SSR．PCR反应体系的建立和优化 ．42 2．3结果与分析 43 华中农业大学2009届博士研究生学位论文2．3．1 华中农业大学2009届博士研究生学位论文 2．3．1 ISSR．抑制PCR法开发SSR标记 43 2．3．3．1 ISSR扩增和测序结果 ．．43 2．3．3．2抑制PCR和SSR的分离 44 2．3．2数据库搜索法开发SSR标记 45 2．3．3 SSR引物的筛选 ．46 2．3．4 SSR．PCR反应体系的建立和优化 48 2．3．4．1 SSR．PCR反应体系的正交优化 ．．48 2．3．4．2退火温度优化 ．．49 2．4讨论 ．．49 2．4．1 ISSR．抑制PCR法开发香菇SSR标记 50 2．4．2数据库搜索法开发香菇SSR标记 51 2．4．3 SSR．PCR反应体系的建立和优化 5 1 第3章中国香菇野生种质遗传多样性的SSR分析 ．53 3．1引言 。．53 3．2材料与方法 54 3．2．1供试菌株 ．54 3．2．2试验试剂 ．55 3．2．2．1贮存液 ．．55 3．2．2．2染色溶液(碱性法) ．．56 3．2．3试验方法 56 3．2．3．1香菇基因组DNA的提取 56 3．2．3．2 SSR-PCR扩增 ．．56 3．2．3．3 PAGE凝胶电泳 57 3．2．3．4银染程序 ．．57 3．2．3．5数据分析 ．．58 3．3结果与分析