基因工程-第三章节基因工程的载体.pptVIP

  1. 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
  2. 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  3. 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  4. 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  5. 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  6. 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  7. 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
基因工程-第三章节基因工程的载体

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 策略: a) 保留完整的T-抗原基因 b) 保留复制起始点(Ori), 间隔区和终止序列 c) 替换晚期转录区基因 含完整早期区段和复制起始点的病毒-质粒载体—穿梭载体。 2 病毒(噬菌体)克隆载体 λ噬菌体克隆载体 Cosmid 克隆载体 M13克隆载体 CaMV克隆载体 TMV克隆载体 SV40克隆载体 反转录病毒克隆载体 腺病毒克隆载体 痘苗病毒克隆载体 杆状病毒表达克隆载体 2.7.1 劳斯肉瘤病毒的生物学特性 Rous Sarcoma Virus, RSV 1) RSV基因组的特点 A. 基因组由4条的RNA分子构成 两条 RNA编码病毒的全部遗传信息 两条较小的RNA分子来自宿主细胞的tRNATrp 2.7 反转录病毒克隆载体 2) RSV病毒的复制与原病毒DNA的转录翻译 2.7.2 构建RSV病毒克隆载体的策略和途径 1)互补的反转录病毒载体系统 2)广寄主反转录病毒质粒载体 3)反转录病毒表达载体 2 病毒(噬菌体)克隆载体 λ噬菌体克隆载体 Cosmid 克隆载体 M13克隆载体 CaMV克隆载体 TMV克隆载体 SV40克隆载体 反转录病毒克隆载体 腺病毒克隆载体 痘苗病毒克隆载体 杆状病毒表达克隆载体 2.8 腺病毒克隆载体 2.8.1 腺病毒的生物学特性 腺病毒是一种无外壳的双链DNA病毒,基因组长约36kb 腺病毒基因组的两端各有一段100bp的反向末端重复序列(ITR),是复制的起始位点。 在两条链的5′端各以共价键结合着一个被称为DNA末端蛋白(pTP)复合物(DNA-TPC)的特化的结构,与腺病毒复制密切相关。 蛋白启动(protein-priming)腺病毒的复制。 自上个世纪50年代发现并成功分离腺病毒以来,已陆续发现了100余个血清型,其中人腺病毒有51种。 2.8.2 ?腺病毒载体的构建 ?增加外源基因的装载容量 ?降低免疫原性 提高靶向性 多克隆位点和筛选标记基因 腺病毒载体的优点: 宿主范围广, 对人致病性低 在增殖和非增殖细胞中感染和表达基因 与人类基因同源 不整合到染色体中,无插入致突变性 能同时表达多个基因 2.8.3 应用 基因治疗癌症 表达真核基因 研究疫苗 2 病毒(噬菌体)克隆载体 λ噬菌体克隆载体 Cosmid 克隆载体 M13克隆载体 CaMV克隆载体 TMV克隆载体 SV40克隆载体 反转录病毒克隆载体 腺病毒克隆载体 痘苗病毒克隆载体 杆状病毒表达克隆载体 线形双链DNA 分子, 其长度因毒株不同而异,在180~200kb 之间。 两端为l0kb 左右的倒置重复序列,与病毒毒力和宿主范围有关,其中70bp 是痘苗病毒复制所必需的,尤其是20bp(ATITAGTGTCYAGAAAAAAT)特别重要。 痘苗病毒能感染人、猪、牛、鼠、兔、猴、羊等脊椎动物。 2.9 痘苗病毒克隆载体 2.9.1 痘苗病毒基因组 2.9.2 构建重组痘苗病毒载体 采用同源重组的方法。 在外源目的基因(和报告基因)两端组装痘苗病毒的tk(胸苷激酶)基因DNA 片段或ha(血凝素)基因DNA 片段,作为重组的同源DNA 片段。 如此构建的痘苗病毒克隆载体,通过与痘苗病毒基因组的tk 基因或ha 基因同源重组,将外源目的基因整合到痘苗病毒基因组上,包装后的重组痘苗病毒转导敏感的动物。 痘苗病毒载体的特点: ① 表达的产物具有与天然产物相近的生物活性和理化性质,较原核及酵母系统的表达产物更接近于天然; ② 重组痘苗病毒具有较好的免疫原性; ③ 外源基因的插入量大; ④ 宿主细胞广泛; ⑤ 表达产物可以进行各种翻译后修饰,无需佐剂就可刺激机体产生体液免疫和细胞免疫,纯化过程相对简单,产物对外界环境相对稳定及易于保存运输; ⑥ 利用痘苗病毒系统表达的外源目的的基因在实验动物中可提供保护性免疫反应。 2 病毒(噬菌体)克隆载体 λ噬菌体克隆载体 Cosmid 克隆载体 M13克隆载体 CaMV克隆载体 TMV克隆载体 SV40克隆载体 反转录病毒克隆载体 腺病毒克隆载体 痘苗病毒克隆载体 杆状病毒表达克隆载体 2.10 昆虫杆状病毒(baculovirus) 如核型多角体病毒AC NPV , 载体的优点: 表达效率高,目的基因插入的容量相对大,使用安全等 。 目前在农业基因工程上应用较多。如

文档评论(0)

kelly + 关注
实名认证
文档贡献者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档