基因工程药物的研究探究 开发跟其产业化.pptVIP

第十章?????? 基因工程药物的研究开发及其产业化 一、基因制药的研究开发状况 二、基因工程药物研究开发的程序 二、基因工程药物研究开发的程序 （一）开发原则 （二）基因工程药物的基本操作 （三）基因工程生物制品研究、开发、生产过程 （二）基因工程药物的基本操作 1.获得基因(即基因来源) （1）人工合成基因 （2）利用cDNA文库（3）从基因组DNA文库中分离基因 （4）基因的改造 如图10-3 2.基因载体的制备 如表10-6、表10-7 3.基因表达 （1）细菌表达系统 （2）酵母表达系统 （3）昆虫细胞多角体病毒表达系统 （4）哺乳动物细胞表达系统 如表10-8 4.产品纯化 5.基因工程药物质量控制 6．基因工程药物质量控制要点 （三）基因工程生物制品研究、开发、生产过程 (1)实验研究：基因克隆重组、表达、分离纯化、质控 (2)小量试制：初步选定工艺流程，确定质控标准，验证工艺可行性。 (3)中间试制：工艺放大，进一步验证技术路线可行性和质量符合标准。至少连续试制三批，证明其一致。形成生产规程草案及国家鉴定合格； (4)申报审评和进行临床研究； (5)提供临床研究资料(Ⅰ，Ⅱ期)申请试生产及Ⅲ期临床研究； (6)总结试生产全部资料，申请正式生产，获准字生产文号。 基因制药的研究开发状况 主要国家基因制药产业化概况，如表10-1 美国基因制药状况：2001年批准27种，369种上临床，如表10-2、表10-3。历年美国批准基因工程药物有116个，近六年为前13年的三倍，近四年批准的药物为前15年之和，2000年批准32个相当于当初11年总和，说明发展迅速如图10-1。 日本基因制药产业动态如表10-4 我国基因制药产业化动态如表 10-5 基因制药的应用范围和开发周期如图10-2 基因工程药物质量控制 产品鉴别 纯度分析（蛋白质含量、杂质来源和分析） 活性测定 安全性评价 稳定性考察 产品的一致性 * 载体 (Vector) 宿主(Host) 质粒 (Plasmids) 细菌 (Bacteria) 植物 (Plants) 酵母 (Yeats) 噬菌体 (Phages) 细菌 (Bacteria) 病毒 (Viruses) 动物细胞 (Animal Cells) ? 特 点： 载 体 逆转录病毒 腺病毒 HSV 细小病毒 sEBV 核酸类型 RNA DNA DNA DNA DNA 基因组大小(Kb) 3.5—9.0 36 152 ～5 172 外源基因插入 ＜9 2－7 30 4 17 容量(Kb) ? ? ? ? ? 重组病毒滴变 中 高 高 高 — 靶细胞状态 必需分裂 静止也可 静止也可 静止也可 — 宿主范围 较宽 宽 宽 宽 宽 基因整合 是 否 可 是 否 特点 可进行人体试验 可通过呼吸道进行基因转移 可将基因导入神经细胞 基因定位整和 游离质粒 比较指标 表 达 系 统 大肠杆菌 酵 母 菌 哺乳动物细胞 昆虫细胞 1．外源基因表 达水平 高 比较高 不高 不高(家蚕除外) 2．培养条件 易 易 难 较难 3．表达产物的 形式 多数不能分泌，胞内形成包涵体 多数能分泌，少数在胞内形成包涵体，有时产物不均一 一般都能分泌 一般都能分泌 4．表达产物的糖基化 不能糖基化 能糖基化，但糖基化程度与天然产物有差别 糖基化好，近似天然产物 能糖基化，但糖基化程度与天然产物有差别 5．产物纯化工艺 细胞破壁容易，多数产物需“复性”，工艺较复杂 胞内表达破壁困难；分泌物纯化工艺简单 纯化简单 纯