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L/O/G/O Novoprotein 专业实践报告 报告人： 学 号： 2014.1.18 熟悉、了解、掌握质粒EGFP和LGALS1分别作为模板，设计引物扩增EGFP基因和LGALS1基因，通过Novorec的方法将两个片段同时重组到pET21a载体上的相关理论知识。 绿色荧光蛋白-人LGALS1融合蛋白大肠杆菌的表达载体的构建及纯化 理论学习 抽提质粒作为模板，扩增EGFP基因和LGALS1基因，重组到pET21a载体上，表达筛选，蛋白检测，蛋白纯化。 实验操作 A 接菌抽提、PCR反应、电泳检测 B C 重组、转化 、阳性鉴定 D 酶切过夜、电泳检测、产物回收 质粒抽提、电泳检测 SDS电泳检测 E Western Blot 免疫印迹 F G 带His标签的人重组蛋白的纯化 一、 接菌抽提、PCR反应、电泳检测  Kit抽提 ↓ PCR反应 ↓ 电泳上样检测 质粒抽提检测 PCR反应检测 二、 酶切过夜、电泳检测、产物回收 PCR反应产物酶切 ↓ 37℃恒温水浴锅过夜