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南京农业大学 生命科学学院;第二章 沉淀法;*;第一节 沉淀的基本原理;第一节 沉淀的基本原理;第二节 蛋白沉淀法;*;*;第二节 蛋白沉淀法;硫酸铵盐析
固体法
g = 533(S2-S1)/(100-0.3S2) (20 ℃)
g = 541(S2-S1)/(100-0.3S2) (20 ℃)
g:1升溶液中需加入固体硫酸铵的克数
S1:表示需要达到的百分饱和度 S2:表示原溶液中的百分饱和度
饱和溶液法
V = V0(S2-S1)/ (S3-S1)
V :表示需要加入的硫酸铵溶液体积(ml)
V0 :表示原来溶剂的体积(ml)
S1与S2同上 S3 :表示需要加入的硫酸溶液的饱和度;硫酸铵分级沉淀示例:
各溶解度区段的沉淀效果(尿素酶):;*;第二节 蛋白沉淀法;盐析的影响因子:
PH对盐析的影响:蛋白质所带净电荷越多,溶解度越大;在净电荷为零时,溶解度最低。一般将PH值调到蛋白质等电点附近,这样有利于盐析。
温度对盐析的影响:在低离子强度或水中在一定范围内蛋白质的溶解度随着温度的升高而增加;但在高盐溶液中,温度的升高有时反而下降。一般情况下在0~4℃操作。
其他:在进行盐析沉淀时,有时需在溶液中加入一定量EDTA,以除去沉淀剂中带入的金属离子。再者是加硫酸铵的时间要控制好,一般2h左右。;第二节 蛋白沉淀法;*;第二节 蛋白沉淀法;第二节 蛋白沉淀法;第二节 蛋白沉淀法;第二节 蛋白沉淀法;6. 结晶沉淀法
影响结晶的因素:
纯度。各种物质在溶液中均需达到一定的纯度才能析出结晶,这样就可使结晶和母液分开,以达到进一步分离纯化的目的。
浓度。结晶液一定要有合适的浓度,结晶的大小、均匀度和结晶的饱和度有很大关系。
pH。pH的变化,可以改变溶质分子的带电性质,是影响溶质分子溶解度的一个重要因素。一般结晶液所选用的pH 与沉淀大致相同。
温度。冷却的速度及冷却的温度直接影响结晶效果。
时间。结晶的形成和生长需要一定时间,不同化合物结晶时间长短不同。
晶种。不易结晶的生化物质常需加晶种。有时用玻璃棒摩擦容器壁也能促进晶体析出。;第三节 核酸沉淀法;第三节 核酸沉淀法;第三节 核酸沉淀法;第三节 核酸沉淀法;Thank You !
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