高原鼠兔脑红蛋白基因的克隆与组织表达-兽类学报.PDF

兽类学报,2010,30 (1):74 - 78 Acta Theriologica Sinica 高原鼠兔脑红蛋白基因的克隆与组织表达 白振忠 韩淑芬 杨应忠 曹越 马兰 刘寿 格日力 (青海大学医学院高原医学研究中心,西宁 810001) 摘要:克隆高原鼠兔脑红蛋白 (Neuroglobin,NGB)基因编码区并检测其在成年高原鼠兔脑组织和其他组织中的 表达, 同时探讨高原鼠兔低氧适应的分子生物学机制。从高原鼠兔脑组织中提取总 RNA,通过 RT - PCR 获得高 原鼠兔 NGB cDNA,将其与 pGEM - T Easy 载体连接,构建重组质粒,蓝白斑筛选阳性克隆并进行鉴定和测序; 制备地高辛标记的 RNA 探针并采用原位杂交法 (In suit hybridization,ISH) 分析脑红蛋白基因在高原鼠兔脑组 织中的分布;采用 RT - PCR 和蛋白印记 (Western blot)检测高原鼠兔不同组织中脑红蛋白的表达含量。将含有 目的片段的阳性克隆经测序和Blast 分析,显示其部分编码序列与 GenBank 中绵羊、大鼠等同源性很高 (大于 84% ),表明本实验所克隆的序列为脑红蛋白基因;原位杂交结果显示 NGB 在青藏高原土著动物高原鼠兔脑部 分布较为广泛;高原鼠兔不同组织中都有 NGB mRNA 表达,NGB 基因并不是中枢神经系统所特有的,睾丸和肾 上腺也有较高的表达。NGB 基因在高原鼠兔脑组织和其他组织中分布较为广泛,推测 NGB mRNA 可能在高原鼠 兔机体较为广泛的区域中发挥着作用, 同时为高原低氧适应相关基因的研究提供了实验依据。 关键词:脑红蛋白;高原鼠兔;基因克隆;基因表达 中图分类号:Q786 文献标识码:A 文章编号:1000 - 1050 (2010 )01 - 0074 - 05 Genetic cloning andexpression of neuroglobin in high altitude hypoxic ad- aptation species———Plateau pika (Ochotona curzoniae)  BAI Zhenzhong,HAN Shufen,YANG Yingzhong,CAO Yue,MA Lan,LIU Shou,GE Rili (Research Center for High Altitude Medicine ,Qinghai University Medical School,Xining 810001,China) Abstract :For identification of the neuroglobin genes coding sequences molecular cloning and examination of the tissues ex- pression spectrums and showing the hypoxic adaptations mechanisms in Plateau pika (Ochotona curzoniae ). Extracting the total RNA ,cloning neuroglobin coding sequences cDNA with reverse-transcription RT - PCR,capturing and confirming the certain sequences with DNA sequencing Examination the tissues mRNA expressions spectrums of neuroglobin with in suit hybridization ISH technology In addition,semi-quantitativ