辣椒疫霉RXLR型效应子PcAvh2的序列多态性基因-微生物学报.PDF

微生物学报 A cta Microbiologica Sinica 2018, 58(12): 2204-2215 /actamicrocn DOI: 10.13343/ki.wsxb Research Article 研究报告 辣椒疫霉RXLR 型效应子PcAvh2 的序列多态性、基因转录 特征及功能 * 陈孝仁 ，张烨，黄沈鑫，邢玉平，纪兆林 扬州大学园艺与植物保护学院，江苏 扬州 225009 摘要：【目的】分析辣椒疫霉中RXLR 型效应子 PcAvh2 的序列多态性，研究该效应子在辣椒疫霉生长 发育和侵染阶段的转录特征及其生物学功能。【方法】本研究通过高保真扩增，分析 2 个烟草疫霉、 1 个恶疫霉和 31 个辣椒疫霉菌株的 PcAvh2 序列；提取辣椒疫霉菌丝、游动孢子囊、游动孢子、萌发休 止孢和 7 个侵染时间点(1.5、3、6、12、24 、36、72 h)的本氏烟根部总 RNA ，利用 RT-qPCR 分析 PcAvh2 的转录表达水平；利用 PVX 瞬时表达系统，分析 PcAvh2 是否抑制 6 种效应子(BAX、INF1 、PsojNIP 、 PsCRN63 、PsAvh241 、R3a/Avr3a)激发的植物免疫反应；利用 CaCl2-PEG 介导的原生质体稳定转化技术， 沉默 PcAvh2 基因，分析辣椒疫霉致病力的变化。【结果】PcAvh2 为典型的 RXLR 效应子，在辣椒疫霉 群体中该效应子具有 10 个等位基因，而且烟草疫霉和恶疫霉中也存在该效应子。该基因在辣椒疫霉的 侵染阶段上调表达，它能够抑制 6 种效应子激发的植物免疫反应，进一步研究发现基因沉默导致辣椒疫 霉的致病力显著下降。【结论】RXLR 型效应子 PcAvh2 是辣椒疫霉中一个重要的侵染致病因子。 关键词：辣椒疫霉，RXLR 效应子，序列多态性，RT-PCR ，免疫反应，基因沉默 疫 霉 菌 (Phytophthora spp.) 隶 属 于 色 菌 界 全世界蔬菜生产造成的损失高达 10 亿美元[3] 。由 (Chromista)卵菌门(Oomycota) ，是一群重要的植物 于疫霉菌在亲缘关系上与真菌相差甚远，多数针 病原菌，引起的植物疫病是危害农林业生产最重 对真菌的杀菌剂对防治植物疫病无效，培育和利 的植物病害之一[1] 。著名的种包括引起马铃薯晚疫 用抗病品种是目前防治植物疫病的主要手段[1] 。因 病的致病疫霉 (P. infestans)和引起大豆根腐病的 此，从植物与疫霉菌互作的角度入手深入解析疫 大豆疫霉(P. sojae)[2] 。辣椒疫霉(P. capsici)侵染危 霉菌操控寄主免疫抗性的致病机理，无疑对防控 害茄科、葫芦科和豆类等上百种农作物，每年给 植物疫病具有重要的指导意义。 基金项目：国家自然科学基金 ；扬州市自然科学基金(YZ2016121) ；公益性行业(农业)科研专项(201303018) ； 2016 年度扬州大学优秀青年骨干教师培养对象项目 *通信作者。Tel ：+86-514；E-mail ：xrchen@ 收稿日期：2018-03-26 ；修回日期：2018-04-22 ；网络出版日期：2018-04-27 陈孝仁等 | 微生物学报, 2018, 58(12) 2205 为阻止病原物的侵染，植物已经进化出两层 上，或是调控 PTI 或者 ETI 引起的植物细胞死亡， 免疫体系，即植物识别病原物相关的分子模式 或是招募植物蛋白激活自身，或是作用于植物的 PAMP (pathogen-associated molecular pattern)产生 免疫分泌系统，或是影响植物激素途径，或是干 的先天免疫 PTI (PAMP triggered immunity)反应和 扰寄主抗性物质运输，或是操控植物感病因子， 识别效应子(effector)产生的后天诱导 ETI (effector 或是干扰植物基因的转录表达等，以多种方式抑