可溶性CD40配体对上皮性卵巢癌的体外作用机制及耐药敏感性影响的研究-妇产科学专业毕业论文.docxVIP

中文摘要可溶性13D40配体对上皮性卵巢癌的体外作用 中文摘要 可溶性13D40配体对上皮性卵巢癌的体外作用 机制及耐药敏感性影响的研究 摘 要 目的：卵巢癌为妇科恶性肿瘤的首要死亡原因之一，5年生存率仍徘 徊在30％左右。近几年，细胞因子基因治疗已成为一种新型的肿瘤治疗方 法，并越来越受到人们的重视。CD40是存在于免疫细胞及多种肿瘤细胞 上的肿瘤坏死因子受体超家族成员，已有研究证明用CD40配体可直接诱 导CD40阳性的人结肠癌、乳腺癌和肺癌细胞的凋亡。本研究旨在探讨人 的可溶性CD40配体(soluble CD40 ligand，sCD40L)对人上皮性卵巢癌细胞 株SKOV3及其对顺铂耐药的卵巢癌细胞株SKOV3／DDP增殖的影响及可 能作用机制，为sCD40L应用于卵巢癌和对DDP耐药的卵巢癌的治疗之可 行性提供理论依据。 方法： 1反转录．聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测SI∞V3及SKOV3／DDP细胞 中CD40基因的表达情况。 2 Cell Titer 96 AQu一非放射性细胞增殖检测法(MTS)检测不同浓度 sCD40L在不同时间对SKOV3、SKOV3／DDP细胞增殖的影响，同时检测 不同浓度的顺铂在相同时间内对两种细胞增殖的影响。 3 MTS法检测sCD40L联合顺铂对SKOV3、SKOV3／DDP细胞抑制增殖 的影响。 4流式细胞术检测sCD40L及sCD40L联合顺铂处理SKOV3细胞前后细 胞周期的改变。’ 5 RT-PCR的方法检测sCD40L及sCD40L联合顺铂处理SKOV3细胞前后 survivin，caspase．3及caspase．9基因的表达情况。 6 RT-PCR的方法检测sCD40L及sCD40L联合顺铂处理SKOV3／DDP细 胞前后MDRl，LRP， GST-Tr及survivin基因的表达情况。 结果： 1 SKOV3及SKOV3／DDP细胞中均有CD40的表达，SKoV3的表达水平 为0．281+0．007，SKOV3／DDP的表达水平为0．427：L-0．012。 中文摘要2不同浓度的sCD40L对两种细胞的抑制作用随浓度的增加而增强，呈明 中文摘要 2不同浓度的sCD40L对两种细胞的抑制作用随浓度的增加而增强，呈明 显的剂量依赖性，不同浓度间比较差异具有显著性俨o．05)；同一浓度作 用于两种细胞，抑制作用的差异无显著性pO．05)。sCD40L对于SKOV3 细胞48h的IC50为3．471xg／ml，对SKOV3／DDP细胞的IC50为3．221sg／ml。 3顺铂对SKOV3／DDP细胞的IC50为25．12I_tg／ml，是对SKOV3细胞的 (IC50为5．521．tg／m1)4．55倍，即SKOV3／DDP细胞耐药倍数为4．55。 4 sCD40L联合顺铂作用于SKOV3细胞，使顺铂IC50由单用时的5．521xg／ ml，分别下降到2．611．tg／ml和1．461sg／ml。对sCD40L1p,g／ml联合顺铂作用 于SKOV3／DDP细胞后，使顺铂的IC50由单一用药时的25．12I_tg／ml下降 为9．251xg／ml，逆转倍数2．7 1；sCD40L 2I-tg／ml联合顺铂使顺铂的IC50下 降为4．831上g／ml，逆转倍数5．20。 5 sCD40L和顺铂作用SKOV3／DDP细胞48h后，sCD40L组和顺铂联合 sCD40L组出现GO／Gl期比例上升，S期比例下降，药物浓度越高，该作 用越明显，sCD40L与顺铂联合作用比单独用sCD40L时更明显(尸如．05)。 6 SKOV3细胞经sCD40L和顺铂作用48h后，各组的survivin mRNA的表 达水平逐渐降低，caspase．3 mRNA及caspase．9 mRNA的表达水平逐渐增 高，与阴性对照组相比较，差异有统计学意义俨o．05)。 7 SKOV3／DDP细胞经sCD40L和顺铂作用48h后，各组的MDRl mRNA、 LRP mRNA、GST-nmRNA及survivin mRNA的表达水平逐渐降低，与阴 性对照组相比较，差异有统计学意义愀0．05)。 结论： 1 SKOV3、SKOV3／DDP细胞中均有CD40的表达。 2 sCD40L可抑制SKOV3细胞的增殖，sCD40L和顺铂联合应用可加强顺 铂对细胞的抑制作用。sCD40L可能使细胞阻滞于G0／G1期而使细胞的生 长受到抑制，sCD40L可能通过下调survivin基因，上调caspase．3，caspase．9 基因而诱导SKOV3细胞凋亡。 3 sCD40L可抑制SKOV3／DDP细胞的增殖，并在一定程度上可逆转 SKOV3／DDP细胞的