课件：实验诊断学及其常用检测项目的临床意义.ppt

肉汤稀释法 抗菌药物的配制与稀释 用蒸馏水或 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH6）稀释抗菌药物。 待检菌和质控菌的准备 同K-B法。 接种、孵育 最终接种浓度为5?105CFU/ml。 结果判读 肉眼可见生长的最低药物浓度为MIC。 质控控制 用无菌96孔聚苯乙烯U型微量板代替试管，其他方法同肉汤稀释法。 微量肉汤稀释法 琼脂稀释法 本法的优点是可以同时做多株菌株的MIC测定，结果重复性优于肉汤稀释法，且易于发现污染或耐药突变菌株。 琼脂稀释法 含药琼脂的制备 取稀释后的抗菌药物 2ml，分别加入18ml消毒后、冷却至50℃左右的琼脂中。 接种 定点接种1～2 ?l菌液。 孵育 35℃18～24h。 结果判读 菌落生长完全被抑制的最低药物浓度为该药对待检菌的MIC。 3.E试验-原理 E试验结合了稀释法和扩散法的原理和特点，操作简便同扩散法，但可以同稀释法一样直接定量检测药物对待检菌的MIC。同纸片扩散法的主要区别在于E试验所用的是一条宽5mm、长50mm，内含干化、稳定、浓度由高至低呈指数梯度分布的一种抗菌药物的商品化塑料试条。 操作过程 培养基、菌液准备和接种均同K-B法，贴E试验试条（90mm平皿可贴1～2根，140mm平皿可贴6根）。 结果判读 孵育后围绕试条可形成一个椭圆形的抑菌圈，抑菌圈与试条的横向相交处的读数即为抗菌药物对待检菌的MIC。 E试验-方法 （六）特殊药敏试验 1.?-内酰胺酶 检测目的： ?-内酰胺酶（ ?- lactamase）能灭活?-内酰胺类抗生素，导致细菌对该类抗生素耐药。 临床意义：流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和卡他莫拉汗菌对青霉素、氨苄西林耐药；葡萄球菌和肠球菌对青霉素等耐药。 注意事项：革兰阴性菌不检测?-内酰胺酶。 检测目的：超广谱?-内酰胺酶（ extend spectum ?- lactamase, ESBL）能灭活包括青霉素和头孢菌素等各种?-内酰胺类抗生素，导致细菌对该类抗生素耐药。 临床意义：ESBL阳性表示对不耐酶的青霉素和头孢菌素耐药。 注意事项：产ESBL的大肠埃希菌和克雷伯菌对所有青霉素和头孢菌素耐药。 2.超广谱?-内酰胺酶 3.耐药基因 检测目的：所有产生耐药的细菌，不论其产生的机制如何，都与起基因位点变化有关，可通过分子生物学技术（DNA探针、PCR等）检测。 临床意义：阳性的基因检测表示对该抗生素耐药。（见P293表7-13） 注意事项：临床上多采用PCR检测技术。PCR检测需有严格的质量控制。 4.耐甲氧西林 葡萄球菌（MRSA） 定义：1?g苯唑西林纸片的抑菌圈直径?10mm，或其MIC ?4 ?g/ml的金黄色葡萄球菌、 对1?g苯唑西林纸片的抑菌圈?17mm，或其MIC ?0 .5 ?g/ml的凝固酶阴性的葡萄球菌。 临床意义：MESA不论体外药敏结果如何，对所有?-内酰胺类抗生素均耐药；绝大多数MRSA呈多重耐药性，包括氨基糖苷类、大环内酯类和四环素类。 定义：对30?g万古霉素纸片的抑菌圈直径?14mm，或其MIC ?32?g/ml，即为VRE 。 临床意义：对VRE目前尚无有效的治疗方法。 5.耐万古霉素 肠球菌（VRE） 定义： ESBL是一种水解青霉素、头孢菌素和单胺类抗生素的酶，主要由肠杆菌科细菌产生。经筛选试验和确证试验即可确定为ESBL。 临床意义：产ESBL大肠埃希菌和克雷伯菌不论体外药敏试验结果如何，对青霉素、头孢菌素和氨曲南无效。 6. ESBLs 七、分子生物学检查 测序 PCR扩增 基因杂交 基因芯片 1.常用的分子生物方法 肿瘤靶向治疗的分子检测 EGFR KRAS/NRAS BRAF ALK/ROS1 2.常用的分子检测项目 抗栓治疗的分子检测 CYP2C19—氯吡格雷 CYP2C9/VKORC1—法华林 常用的分子生物项目 代谢酶相关的分子检测 ALDH1—酒精/硝酸甘油代谢 ApoE/SLCO1B1—他叮类药物 常用的分子检测项目 复习思考题 1.实验诊断学的定义、分类？ 2.实验诊断学的现状和发展趋势？ 3.医院感染最常见的病原体是什么？ 4.医院感染的感染途径和易感宿主是什么？ 5.采集血培养标本的要求是什么？ 6.临床最常用的革兰染色的意义是什么？ 7.临床最常用的药敏试验的方法是什么？ 8.分子生物学检测的临床意义是什么？ 谢 谢 ? hubertzhao@163.com THANK YOU SUCCESS * * 可编辑