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真核生物的转录起始是在转录因子的 协助下，RNA聚合酶辨认结合转录起 始点上游的DNA序列 (启动子)，生成 起始复合物。 第五节 内含子的剪接、编辑及化学修饰 一、 RNA中的内含子 外显子（exon or extron）：真核细胞基因DNA中的编码序列，这部分序列可转录为RNA，并翻译成蛋白质，也称表达序列。 内含子（intron）：真核细胞基因DNA中的不编码序列，这部分序列并不编码蛋白质，又称间隔序列。 1、内含子的概念及发现 分子杂交技术检测非编码的内含子的存在 2、内含子的种类 I 类内含子（核、线粒体、叶绿体） II 类内含子（真菌、藻类和植物线粒体和叶绿体mRNA前体） III 类内含子 mRNA前体中的内含子 tRNA前体中的内含子 3、内含子的结构特点 内含子的边界序列的核苷酸具有保守性 4、RNA的主要加工过程 加帽子反应 加Poly（A）反应 RNA的剪接 RNA的切割 二、 RNA的剪接 mRNA前体内含子的剪接 I类内含子的剪接 II类内含子的剪接 RNA的剪接（Splicing） 将转录形成的mRNA前体（pre-mRNA）中的内含子剪除，将外显子连接起来的加工过程． 　　真核生物断裂（不连续）基因在表达过程中时必须经历的步骤． （一）mRNA前体内含子的剪接 snRNA：(small nuclear RNA) 100-300 核苷酸，以U分类：U1-6 snRNP：(small nuclear ribonucleoprotein) 作为mRNA剪切的场所。 hnRNA：(heterogenous nuclear RNA) mRNA原始转录产物或前体 mRNA 的剪接 套索剪切模式 内含子有 5′ GU┄┄AG 3′ 5′GU U1-snRNA 结合 3′AG 分支点 A U2-snRNA 结合 U1-snRNA, U2-snRNA等形成剪接体将内含子切除 ① snRNP剪接体的形成 U1 snRNA识别mRNA前体5’剪接点 U2AF识别3’剪接点并引导U2 snRNP与分支点相结合，形成剪接前体 进一步与U4、U5、U6 snRNP 三聚体相结合，形成60S的剪接体 ②二次转酯反应 hnRNA的内含子两端5’GU—AG-OH3’与U1,U2配对结合 （二）I类内含子的剪接 自我剪接型内含子 四膜虫rRNA的内含子（ 1981，Cech ） G OH 3′ G 5′ OH 5′ 3′ G OH 414 G 399 5′ 3′ 395 5′ 3′ E1 E2 I 四膜虫rRNA的自我剪接 5′ 3′ L19RNA 具有催化活性的片段 I 型自我剪接内含子 （三）Ⅱ类内含子的剪接 自我剪接型内含子 II 型自我剪接内含子 RNA的可变剪接(选择性剪接) 可变剪接是指同一基因转录形成的 RNA前体可经过一种以上剪接方式产 生多种不同的mRNA的过程。 可变剪接 内含子的变位剪接 在真核生物个体发育或细胞分化时可以有选择地越过某些外显子或某个剪接点进行变位剪接，产生出组织或发育阶段特异性mRNA. 三、 RNA的编辑和化学修饰 (1)概念 基因转录产生的RNA分子，特别是mRNA分子，由于核苷酸的缺失、插入和置换，基因转录物的序列不与基因编码序列互补，使翻译生成的蛋白质氨基酸组成，不同于基因序列中的编码信息. (2)RNA编辑的方式 剪接替换（A→I; C → U） U的缺失或添加 剪接的化学修饰 课后作业 试比较原核生物与真核生物转录的区别？ mRNA 肽链 原核（多顺反子） 真核（单顺反子） 两个顺反子之间距离较远 两个顺反子之间距离较近 SD sequence AUG ~10bases UAAGGAGGU:complementary with 16s rRNA 5’ The site for ribosome binding SD sequence 在起始密码子AUG上游9-13个核苷酸处，有一段可与核糖体16S rRNA配对结合的、富含嘌呤的3-9个核苷酸的共同序列，一般为AGGA，此序列称SD序列. 使得结合于30S亚基上的起始tRNA能正确地定位于mRNA的起始密码子AUG。 二、真核生物mRNA的特征 真核mRNA的5’端存在帽子结构 绝大多数真核mRNA具有Poly（A）尾巴 真核mRNA的5’端帽子结构特点 真核mRNA5’端帽子结构功能 有利于核糖体对mRNA的识别，Cap0必需 帽子结构具有增强翻译效率的作用： 增加mRNA的稳定性，避免核酸酶的作用 真核mRNA