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重复性（repeatability） 重复性是指在同一条件下对同一批样品，从样品供试品制备开始，制备至少六份以上供试品溶液(即n6)，或设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试溶液，进行测定，计算其含量的平均值和相对标准偏差(RSD)。 样品质量(g) 丹酚酸B（％） 丹参酮ⅡA（％） 高 0.5005 5.7485±0.0325 0.4540±0.0023 0.5004 5.6514±0.0643 0.4594±0.0021 0.4999 5.7763±0.0082 0.4529±0.0007 中 0.3003 5.8647±0.0135 0.4575±0.0011 0.3003 5.7112±0.0353 0.4539±0.0029 0.3006 5.6947±0.0232 0.4430±0.0021 低 0.1999 5.8618±0.0704 0.4751±0.0023 0.2005 6.0239±0.0117 0.4489±0.0029 0.2001 5.9838±0.0509 0.4502±0.0096 平均值±SD(%) 5.8129±0.1298 0.4550±0.0090 RSD(%) 2.2 2.0 重现性（reproducibility） 重现性是指在不同的实验室由不同分析人员测定结果的精密度。当分析方法将被法定标准采用时应进行重现性实验。 3批月季花样品中金丝桃苷、异槲皮苷的含量 样品 来源 中国药科大学结果 江苏省药检所结果 相对偏差（%） 金丝桃苷 (%) 异槲皮苷 (%) 金丝桃苷 (%) 异槲皮苷 (%) 金丝桃苷 (%) 异槲皮苷(%) YJH-1 福建漳州 0.2434 0.2203 0.2552 0.2316 2.4 2.5 YJH-3 安徽亳州 0.2478 0.2433 0.2549 0.2577 1.4 2.9 YJH-7 陕西宝鸡 0.2445 0.2414 0.2618 0.2539 3.4 2.5 表明方法重现性良好！ 5、检测限及定量限（limit of detection and quantification) 检测限是指试样中被测物质能被检测出的最低浓度或量。 定量限是指样品中被测物质能被定量测定的最低量。 丹酚酸B 丹参酮ⅡA 峰面积1 6.6 5.9 峰面积2 6.5 5.9 峰面积3 6.6 5.7 峰面积4 6.5 6.0 峰面积5 6.4 5.8 RSD％ 1.3 1.9 LOQ（ng） 9.00 1.37 LOD（ng） 4.50 0.342 6、耐用性(robustness) 耐用性 系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法用于常规检验提供依据。 HPLC变动因素有： GC变动因素有： TLC变动因素有： 1 2 Diamonsil-C18 (5μm, 4.6mm×250mm) 不同色谱柱 Agilent ZORBAX Eclipse Plus-C18 (5μm, 4.6mm×250mm) 不同色谱柱 7、系统适用性试验(system suitability) 对分析设备、电子仪器与实验操作、被测试样品等一起作为完整的系统进行评估，确保系统在样品分析的时候能很好地运行。其参数的设置需根据被验证方法的类型而定。 UPLC的原理：van Deemter方程 UPLC 1.7 um Particle 2004’s UPLC的优势 高分离度 高速度 高灵敏度 Agilent RRLC Shimadzu UFLC Agilent 6890N型气相色谱仪 （三）气相色谱法（Gas chromatography, GC） 1、GC仪 载气：H2、N2、 He 进样系统：溶液直接进样或顶空进样 色谱柱：弹性石英毛细管柱 柱温箱 ：恒温和程序升温 检测器 ： 2、GC仪组成 弹性石英毛细管柱 不锈钢填充柱 涂壁毛细管柱 载体涂层毛细管柱 2、GC仪组成 色谱柱 检测器 火焰离子化检测器(flame ionization detector , FID) 热导检测器(thermal conductivity detector, TCD) 氮磷检测器(nitrogen-phosphorus detector, NPD) 火焰光度检测器(flame photometric detector , FPD) 电子捕获检测器(electron capture detector , ECD) 质谱检测器(mass spectrometric detector, MSD) 2、GC仪组成 3、GC定性方法 两个定性参数:tR值、MS 4、GC定量方法 内标校正因子法 外标法 面积归一化法 标准溶液加入法