生物技术制药第六章节 植物细胞制药文档资料.pptVIP

4.有机氮源 常用蛋白质水解物或各种氨基酸，有机氮源对细胞的早期生长有利，氨基酸的加入是为了代替或增加氮源的供应 5.维生素 通常是维生素自养型，但大多数不能满足需要 三、培养方法 原生质体培养 按培养对象分 单细胞培养 固体培养 按培养基类型分 液体培养 悬浮培养 按培养方式分 固定化细胞培养 培养方法 固体培养包括琼脂培养和固定化培养 优点：简便易行、所占空间小 缺点：①随着培养的进行，培养基中营养物质产生浓度差，进而导致愈伤组织生长不平衡 ②外植体基部插入培养基中，该处气体交换不畅，阻碍了组织呼吸正常进行，同时植物生长过程中排出的有害物质的堆积会影响生长 ③由于重力作用或光线的入射局限性，导致愈伤组织细胞间出现极化现象，结果导致细胞群体不均匀状态 ④改变培养条件后，固体培养物的一些生理生化指标有时会发生改变 固体培养的特点 培养温度为25℃左右；常需光照，16h/d，光强几百~几千LX。由于植物组织在培养基上生长时要不断消耗养分、散失水分和累积代谢产物，因此外植体在培养周左右必须移至新鲜培养基上，以保持继续生长。移换一次培养基成为一次继代培养，经过一定次数的继代培养，其培养物可用于悬浮培养。液体培养系统包括悬浮培养和成批培养，半连续和连续培养。悬浮培养有静止培养和振荡培养 （1）定义：将培养基一次性地加入反应器，接种、培养一定时间后收获细胞的方式 （2）生物反应器（图6-3）：最适于植物细胞培养的当属气升式反应器 优点：用通气代替搅拌，避免了使用机械搅拌所致的细胞破碎、通气受限制、培养物 易被污染等缺点，细胞产量也明显提高 另外，在植物细胞培养过程中，由于次级代谢产物的大量累积发生在细胞生长稳定期，人们设计了植物细胞的两步培养法；即使用两个反应器，第一个用于细胞生物量的累积，第二个用于次级代谢产物的生产（两个反应器中培养基的营养组分不同） 如日本科学家就是利用此方法开发出了世界上第一个植物细胞工程商品——紫草素。通过提高第二个反应器中Ca2+浓度的方法，大幅度增加了培养液中紫草素含量，从而实现了利用生物工程法生产紫草素的工业化 1.成批培养法 定义：在反应器中投料和接种培养一段时间后，将部分培养液和新鲜培养 液进行交换的培养方法 半连续培养可看成是一种具有定时进出装置的成批培养系统。当培养进行到一定阶段时，每天或每隔两天收获一部分培养物，然后加入新鲜培养基，通过调整收获细胞的数量和次数来保持细胞重量的恒定 2.半连续培养法 3.连续培养法 定义：利用连续培养反应器，在投料和接种一段时间后，以一定的速度连 续采集细胞和培养液，并以同样速度供给新鲜培养基以使细胞生长 环境维持恒定的培养方法 特点：①培养时间长，细胞生产能力比成批培养法高 ②细胞生长缓慢，培养时间长，需要维持系统的无菌状态，技术条 件要求较高 4.固定化培养法 最适合植物细胞培养的方法 定义：利用固定化反应器进行培养，将细胞固定于网状多孔板、尼龙网套和中空 纤维膜等反应器的膜表面，放入培养液中进行培养及连续收集培养物的方法 优点：细胞位置固定，易于获得高密度细胞群体和维持细胞间的物理化学 梯度，利于细胞组织化，易于控制培养条件及获得次级代谢产物 第四节 影响植物次级代谢产物累积的因素 影响次级代谢产物产生和累积的因素 1.生物条件：外植体、季节、休眠、分化等 2.物理条件：温度、光（光照时间、光强、光质）、通气（氧气）、酸 度和渗透压 3