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PAGE 1 HYPERLINK / （浙科版）现代生物科技专题知识点总结 2012 12 19 基因工程 广义的遗传工程：指把一种物的遗传物质（细胞核、染色体脱氧核糖核酸等）移到另一种生物的细胞中去，并使这种遗传物质所带的遗传信息在受体细胞中表达 基因工程是狭义的遗传工程，就是把一种生物的基因转入另一种生物体中，使其产生我们需要的基因产物，或者让它获得新的遗传性状。其核心是构建重组DNA分子。 基因工程诞生的理论基础：DNA是遗传物质的发现、DNA双螺旋结构的确立、遗传信息传递方式的认定。 基因工程创建的技术保障：限制性核酸内切酶、DNA连接酶和质粒载体的发现与应用。 基因工程的工具：限制性核酸内切酶、DNA连接酶和质粒。 工具酶：限制性核酸内切酶、DNA连接酶 限制性核酸内切酶 （1）功能：识别和切割DNA分子内一小段特殊核苷酸序列。 （2）特性：一种限制酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列，并在特定的位点切割（特异性） （3）来源：主要是原核生物（细菌） （4）化学本质：蛋白质 （5）切割后形成末端种类：具有粘性末端DNA、具有平末端的DNA （6）作用于DNA的部位：磷酸二酯键 （7）在基因工程中用途：①用于获取目的基因 ②用于切割目的基因和质粒，形成相同的粘性末端。便于形成重组DNA分子 DNA连接酶 （1）作用：将具有末端碱基互补的2个DNA片段连接起来。大肠杆菌Ｅ．coliDNA连接酶只能连接带有互补的粘性末端，T4噬菌体的T4DNA连接酶可以缝合两种，但连接平末端的效率较低 （2）作用部位：磷酸二酯键 （3）注意：DNA连接酶作用于磷酸二酯键，对粘性末端（平末端）碱基序列没有要求。 （4）DNA连接酶在基因工程的作用：可以将粘性末端互补的质粒和目的基因连接在一起。 （5）DNA聚合酶和DNA连接酶的比较 比较项目 DNA聚合酶 DNA连接酶 ? ? 不 ? 同 ? 点 形成磷酸二酯键的方式 只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键 是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个脱氧核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键 是否需要模板 以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链 是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，因DNA连接酶不需要模板 是否参与基因工程 没有参与 在基因工程中，DNA连接酶可以作为连接运载体和目的基因的“针线” ? 相 同 点 ①它们的化学本质都是蛋白质。 ②两者均属于酶，具有酶的基本属性和特点。 ③两者都能形成磷酸二酯键，即在相邻核苷酸的3位碳原子的羟基与5位碳原子上所连接的磷酸基团的羟基之间形成。 ④两者均参与DNA的复制、逆转录等过程。 质粒 质粒：是能够自主复制的双链环状DNA分子，是一种特殊的遗传物质。它在细菌中以独立染色体之外方式存在。（注意：不是细胞器） 质粒常作为基因工程的载体，最常用的是大肠杆菌质粒，常含有抗生素抗性基因（标记基因） 功能：将目的基因导入受体细胞 （4）质粒为什么可以作为载体？能在宿主细胞内稳定保存并大量复制；有一个至多个限制酶的切割位点，以便接受外源基因；有特殊的标记基因，便于检测是否导入成功。 （5）基因工程中的载体类型：λ噬菌体、动植物病毒等。 9、基因工程的基本操作步骤：包括目的基因的获得、重组DNA的形成、重组DNA导入受体细胞、筛选含有目的基因的受体细胞、目的基因的表达 （1）获得目的基因 ①如果目的基因的序列是已知的，用化学方法合成（若蛋白质中氨基酸序列已知；若mRNA中的碱基序列已知；若DNA中碱基序列已知）或聚合酶链式反应（PCR）扩增目的基因 ②若基因序列不知，从包含目的基因在内的基因文库中获取③④ （2）形成重组DNA分子——最核心步骤 ①过程：用同一种限制酶切割目的基因（一般要有两个切点）和质粒（一个切点），形成相同的2个粘性末端，然后用DNA连接酶连接起来形成重组DNA分子 ②进行场所：体外。 （3）将重组DNA分子导入受体细胞 ①常用的受体细胞有：大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌、动植物细胞等。植物细胞体细胞或受精卵都可以，动物细胞一般用受精卵作为受体细胞。用酵母菌等单细胞的原因是繁殖速度快。 ②若宿主细胞大肠杆菌，用氯化钙处理大肠杆菌，增加细胞壁的通透性。 ③转植物的培育常用农杆菌转化法：将目的基因插入Ti质粒上，形成重组DNA，导入农杆菌中，再利用农杆菌的特性去感染细胞细胞，从而将目的基因整合到受体细胞的DNA上 筛选含有目的基因受体细胞 ①利用质粒上有抗生素抗性基因等标记基因 ②实例：重组DNA分子 导入 所有受体细胞接种 含四环素的培养基 筛选 活的细胞 目的基因的表达 ①基因工程成功的