用于稳定同位素分析的植物和土壤的水分抽提时间.doc

PAGE PAGE 5 Adam G. West*, Shela J. Patrickson and James R. Ehleringer, Water extraction times for plant and soil materials used in stable isotope analysis, rapid communications mass spectrometry, 2006; 20: 1317–1321 用于稳定同位素分析的植物和土壤的水分抽提时间 Adam G. West*, Shela J. Patrickson and James R. Ehleringer 犹他大学生物系，Salt Lake City, UT 84112, USA 摘要：稳定同位素分析在生态学上的应用通常需要抽提大量的植物和土壤样品。随着质谱的发展，水分抽提，而不是同位素分析本身，已经成为了本研究的主要瓶颈。采用低温真空蒸馏技术，我们生成了抽提时间曲线来确定抽提所需要的最佳时间。我们的研究结果表明，植物茎的平均时间是60-75分钟，粘土需要40分钟，而沙土需要30分钟，而叶片需要20-30分钟。本文报道的与以前的文献相比，时间缩短了一些，但是抽提过程仍然是植物水分分析的限速步骤。总而言之，为了提高生态学研究中的同位素分析效率，我们仍然需要改进技术以消除抽提的需要。 植物和土壤水的稳定同位素研究已成为生态学研究的热门方向1,2。主要应用包括植物水来源的确定3、植物对降雨变化的响应4、土壤水分蒸腾与蒸发的区分5以及地下水的补充6等方面研究。研究中，经常需要大量样品分析以匹配自然生态系统中的时空变化。过去40年中，很多抽提技术被使用7，包括机械挤压8，9、采用不融合液体通过离心的方法来替换10、微蒸馏法（锌）11、采用燃料的沸点蒸馏12、低温真空蒸馏9,13,15等。这些方法中，沸点蒸馏和真空蒸馏是应用最广泛的方法。研究表明，两种方法可比性好而且精确。真空蒸馏由于其操作简单，且不需要附加的溶剂而得到越来越多的应用。真空蒸馏期间，水分从样品中蒸发出来并凝结在收集管中。在收集管中凝结的同位素遵循雷利（Rayleigh）蒸馏曲线16，因此，水分的抽提必须完全以获得未分馏水分样品。这消耗大量的时间，往往需要1-16个小时以完全蒸馏9,16-18。实际上，我们或许不需要完全蒸馏。有研究表明，对于沙土而言，收集98%的水分已经可以达到水分不分馏的目标了17。现在还没有其他相关研究，也没有对某一物质抽提所需要的最小抽提时间的研究。生态同位素研究已经扩展到时空尺度。同位素质谱的技术进步已提供了快速而准确的Delat D和Delta18O的分析能力19。作为结果，分析的瓶颈是水分的抽提，而不再是分析本身。提高水分抽提效率将减弱样品处理的瓶颈。本研究确定了植物和土壤样品抽提所需要的最少时间。同时讨论了改进同位素分析效率的潜在方法。 实验 抽提方法与技术描述 本研究采用低温真空蒸馏技术。该仪器包括6个独立的玻璃组件（全固定在1英寸的不锈钢真空管上）(图1)。每个组件包括3/8英寸的玻璃管，连接一个Varian1 801真空表和NUPRO1阀门。固定在玻璃管两端的是收集管(1/2英寸耐热玻璃Pyrex)和抽提管(1英寸耐热玻璃)。所有连接部分采用的是适当大小的Ultra-Torr真空接头或Swagelok接头(见图1的配件号)。整个真空管连接到一个真空泵上（Edwards #5) 图1 低温真空蒸馏结构图 提取水分样品的时候，先拧下抽提管，把放好样品的小瓶放在抽提管里边。然后重新连接好并浸泡在液氮之中，冷冻样品。对于包含土壤的样品，在样品瓶上包裹玻璃绒以防止其扩散到系统中。小心操作以确保玻璃绒不会影响O形圈和抽提管的密封。一旦样品结冻，就可以利用真空泵抽整个系统以达到60 mTorr的真空度。这个时候，我们需要关闭真空管，利用真空表来监测独立系统中的压力变化。如果真空度保持不变的话，去掉液氮杯，并采用一个含加热元件的充满水的烧杯来加热抽提管。在整个抽提期间，水始终保持沸腾。需要定期补充水以保持正常水位。而液氮杯用来浸泡收集管以冷凝水汽。蒸馏完成后，分别去掉水和液氮。取下收集管，用Parafilm密封条密封并等其解冻。接下来水样品被利用移液管倒入存储瓶以用于同位素分析。来自针叶树种的茎和叶片有时包含有机化合物，这使得水样外表看上去类似牛奶一般，而且有很强的气味。这种情况下，可以加活性碳以吸收这些混合物。接下来过滤以进行同位素分析。在我们的研究中，我们从抽提管放入沸腾的水中的时候开始计时，到收集管取下的时候计时结束。 同位素分析 同位素分析测试在SIRFER实验室进行(University of Utah, Salt Lake City)。水被直接注入