几种鳗鲡苗种的种质鉴定及其遗传多样性研究-水产养殖专业论文.docxVIP

几种鳗鲡苗种的种质鉴定及其遗传多样性的研究 摘 要 鳗鲡具有很高的营养价值和药用价值，为上等的食用鱼，民间作为滋补食品。我国是 世界上最大的鳗鲡生产国，鳗鲡产品出口额在单项农产品出口额中占据首位。由于人们对 我国沿海日本鳗鲡苗种资源的过度捕捞，导致日本鳗鲡苗种种质资源极度匮乏且供给不稳 定，因此最近几年我国引进了新的鳗鲡品种进行养殖。鳗鲡形态十分相似，因此在新品种 引进后容易造成种质资源混乱。本研究利用 AFLP 技术及线粒体 DNACOⅠ和 COⅡ分子标 记技术对几种鳗鲡的苗种进行种质鉴定，并研究几种鳗鲡苗种对高低温的耐受性，以期为 鳗鲡新品种的推广养殖提供基础资料。 1．以日本鳗鲡（Anguilla japonica）、欧洲鳗鲡（A. anguilla）、美洲鳗鲡（A. rostrata）、 印尼鳗鲡（A. bicolor Pacifica）、菲律宾鳗鲡（A. mormorata）五种鳗鲡的幼鳗为实验对象， 讨论其对极限高、低温的耐受性及种间差异。实验结果表明：不同种的鳗鲡幼鳗对环境温 度的耐受范围具有种间差异。日本鳗鲡、美洲鳗鲡、欧洲鳗鲡、印尼鳗鲡、菲律宾鳗鲡高 温―死亡高峰温度‖分别为 39℃、38℃、37.5℃、39℃、38℃，日本鳗鲡对高温的耐受性最 好，欧洲鳗鲡耐受性最差，但种间差异不显著；日本鳗鲡、美洲鳗鲡对低温的耐受性最好， 能在冰水混合物中生存，欧洲鳗鲡、菲律宾鳗鲡、印尼鳗鲡对低温耐受性依次减弱，低温 ―死亡高峰温度‖分别为 2℃、5℃、10℃。 2．利用扩增片段长度多态性（Amplified fragment length polymorphism，AFLP）标记 技术研究日本鳗鲡、欧洲鳗鲡、美洲鳗鲡、非洲鳗鲡、印尼鳗鲡、菲律宾鳗鲡 6 种鳗鲡群 体的遗传多样性和群体间遗传分化。8 对引物在 180 个个体中共扩增出 519 个位点，遗传 多样性结果显示，6 种鳗鲡的多态位点比例（P）介于 54.62%-63.85%之间，其中印尼鳗多 态位点比例最低为 54.62%，欧洲鳗多态位点比例最高为 63.85%；平均每位点等位基因数 （A）介于 1.5462-1.6385 之间，平均为 1.5918；平均每位点有效等位基因数（Ae）介于 1.2657-1.3289 之间，平均为 1.3040；Shannon 氏指数（I）介于 0.2520-0.3066 之间，平均 为 0.2810；Nei’s 基因多样性指数（H）为 0.1632-0.2002，平均为 0.1837，说明 6 种鳗鲡都 具有较高的遗传多样性。群体间遗传分化结果显示欧洲鳗与美洲鳗遗传距离（D）最小为 0.0543，其次是菲律宾鳗和印尼鳗，遗传距离为 0.1253，其余鳗之间的遗传距离介于 0.2377-0.3030 之间。通过聚类分析结果显示，6 种鳗鲡聚为 2 大类，美洲鳗、欧洲鳗聚为 一支然后和非洲鳗再聚为一支，印尼鳗、菲律宾鳗聚为一支然后和日本鳗再聚为另一支。 同时利用 AFLP 技术对 6 种鳗鲡进行种质鉴定，通过 E-AAG/M-CGT 和 E-AAG/M-CTT 两 对引物中的 5 个特异性位点能够对 6 种鳗鲡进行有效的鉴别。 3．对日本鳗鲡、欧洲鳗鲡、美洲鳗鲡、非洲鳗鲡、印尼鳗鲡、菲律宾鳗鲡 6 种鳗鲡 线粒体 DNA 细胞色素 C 氧化酶亚基Ⅰ（COⅠ）和细胞色 C 素氧化酶亚基Ⅱ（COⅡ）基 I II II 因片段碱基序列进行比较。6 种鳗鲡 COⅠ基因片段核苷酸序列均为 652bp，6 种鳗鲡 COⅠ 基因片段核苷酸序列共有 105bp 的差异，其中有 18 个位点发生碱基颠换，87 个位点发生 碱基转换；6 种鳗鲡 COⅡ基因片段核苷酸序列均为 412bp，6 种鳗鲡 COⅡ基因片段核苷 酸序列共有 46bp 的差异，其中 6 个位点发生碱基颠换，40 个位点发生碱基转换。在 6 种 鳗鲡 COⅠ和 COⅡ基因片段中 A、T、G、C 含量非常相似，并且 A+T 的含量都大于 G+C 的含量。 关键词： 鳗鲡，温度，AFLP，遗传多样性，遗传分化，种质鉴定，线粒体 DNACOⅠ， 线粒体 DNA COⅡ III III The analysis of the germplasm identification and genetic diversity of the several Anguilla species Abstract Anguilla is of great commercial importance and medicinal value. So it has been captured and cultivated in many parts of the world. Our country is