加味三才汤对糖尿病SD大鼠肝脏脂肪变性和 keap1-Nrf2通路影响的实验研究-中西医结合临床(感染)专业论文.docx

成都中医药大学 成都中医药大学 2015 级博士学位论文 万方数据 万方数据 中文摘要 目的：本课题旨在通过实验研究，观察加味三才汤对 2 型糖尿病大鼠肝脏脂 肪变性和 Keap1-Nrf2 通路的影响，探讨其防治该病的作用机理，为其日后成为 一种新的中成药提供科学的理论依据。 方法：健康清洁级 SD 大鼠 90 只试喂养 1 周结束后，随机分为正常对照组（10 只），模型组（80 只）。正常对照组予普通饲料喂养，模型组予高糖高脂饲料喂 养。5 周后，模型组空腹(禁食，不禁水 12 小时)腹腔注射 PH4.3 枸椽酸钠缓冲 液配制的 STZ 溶液，按 30mg/kg 浓度给药。正常组空腹腹腔注射等体积 PH4.3 枸椽酸钠缓冲液。72h 后断尾取血，用血糖仪测随机血糖，血糖值≥16.7mmol/L 视模型成功。死亡 3 只，剔除 7 只，共 70 只大鼠血糖达标。再将其分为糖尿病 模型组（12 只），阳性药对照组（15 只），中药高剂量组（13 只），中药中剂量 组（15 只），中药低计量组（15 只），继续高糖高脂喂养，并开始药物灌胃（灌 胃量 10ml?kg-1?d-1）。其中中药各组分别灌服加味三才汤高、中、低药液，阳性对 照组灌服水林佳（28mg?kg-1?d-1）药液，正常对照组和糖尿病模型组灌服等体积蒸 馏水。自用药开始，每日观察并记录各组大鼠的活动情况、精神状态、摄食及饮 水情况、体毛变化及死亡等情况，每周测体重一次。4 周结束后，禁食、不禁水 12 小时，测各组大鼠 FBG，体重。股动脉取血，生化分析仪测 TG、TC、HDL-c、 LDL-c；ELISA 法检测 MDA、H2O2、FFA、INS；并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）； 处死大鼠取肝右叶组织，HE 染色观察肝脏病理切片；免疫组化法观察肝组织 Keap1、Nrf2、CAT、GPX 蛋白表达；反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝组 织 Keap1mRNA、Nrf2mRNA、SODmRNA 表达。 结果：加味三才汤可以改善 2 型糖尿病大鼠肝脏的脂肪变性。实验结果经统 计学处理后发现，实验结束时与正常对照组比较，糖尿病模型组以上各指标均显 示异常（P0.05，P0.01）。而与糖尿病模型组比较，各用药组均能不同程度的 改善以上各指标，其中，血清 TG、TC、LDL-c、FFA、MDA、均降低（P0.05，P0.01）。 与糖尿病模型组比较，中药各组能 FBG、INS、HOMA-IR 降低（P0.05，P0.01）， 西药组无统计学差异（P0.05）。与糖尿病模型组比较，中药高、中剂量组 HDL-c 升高（P0.05），H2O2 降低（P0.05），Keap1 蛋白表达降低（P0.05），Nrf2 蛋 3 白表达升高（P0.05），Nrf2 mRNA、SODmRNA 升高（P0.05）；中药高剂量组 CAT、 GPX 升高（P0.05），Keap1mRNA 降低（P0.05）。 结论： 1.高糖高脂饲料喂养 9 周，联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射可以成功复制实 验性 SD 大鼠 2 型糖尿病合并非酒精性脂肪肝模型。该模型具有高血糖，血脂异 常，胰岛素抵抗等特点，与人类 2 型糖尿病合并非酒精性脂肪肝的临床特征类似， 故此模型可用于 2 型糖尿病合并非酒精性脂肪肝的研究。 2.加味三才汤防治 2 型糖尿病 SD 大鼠肝脏的脂肪变性。其作用机理可能是 通过以下途径实现的：①降低空腹血糖、胰岛素和胰岛素抵抗指数，纠正血脂代 谢紊乱，从而改善胰岛素抵抗状态；②激活抗氧化应激 Keap1-Nrf2 通路及其调 控的 SOD、CAT、GPX 活性，提高机体抗氧化能力。 关键词：加味三才汤 糖尿病性脂肪肝 氧化应激 keap1-Nrf2 通路 4 ABSTRACT Objective: The Experimental research is designed to observe the influence of the supplemented San-Cai decotion on the liver fatty degeneration and keap1-Nrf2 transduction of the rats with diabetes mellitus , and study the mechanisms. It will provide the scientific basis for that the supplemented San-Cai decotions becoming a new Chinese patent drug. Methods: 90 healthy male SD rats were randomly