生物化学课件 第五章节蛋白质的共价结构文档资料.pptVIP

第五章 蛋白质的共价结构 蛋白质的结构层次 1952年丹麦人Linderstrom-Lang最早提出蛋白质的结构可以分成四个层次: primary structure 一级结构： 氨基酸序列 secondary structure 二级结构： α螺旋，β折叠 tertiary structure 三级结构：所有原子空间位置 quanternary structure 四级结构： 蛋白质多聚体 1969年正式将一级结构定义为氨基酸序列和双硫键的位置。 介于二级结构和三级结构之间还存在超二级结构（二级结构的组合）和结构域（在空间上相对独立）这两个层次。 肽基的C、O和N原子间的共振相互作用 历史上第一个被确定氨基酸序列的蛋白质胰岛素insulin 胰岛素的历史 第一个生化药物 最小的蛋白质，由A链(21 AA)和B (30 AA)组成；动物胰腺?细胞分泌的一种激素,告诉细胞往里面运输糖、氨基酸、K+； 1921年Banting Best 从胰腺中抽提出了有活性的胰岛素，1923年Banting Macleod获Nobel医学奖； 1943－53年，Sanger确定了牛胰岛素的一级结构，1958年获得Nobel化学奖； 1981年，Berg（因DNA重组技术得奖）在大肠杆菌中表达了人胰岛素. 蛋白质一级结构测定的步骤 1、蛋白质的分离纯化 2、测定蛋白质分子中多肽链的数目 3、亚基分离 4、二硫键的拆分与保护 5、分析每一多肽链的氨基酸组成 6、鉴定多肽链的N-末端和C-末端残基 7 、多种方法的部分水解 8、测序 9、重叠 10 、二硫键位置的确定 N端的测定方法 1、Sanger（二硝基氟苯）法 2、丹磺酰氯法 3、Edman法 4、酶降解法 氨基酸与2,4一二硝基氟苯(DNFB)的反应（sanger反应） Sanger试剂(FDNB)标记N末端 ABCDE ↓ *ABCDE ↓ *A，*AB，*ABC，*ABCD，*ABCDE ↓ *A,*A+B,… … *A+B+C+D+E ↓ *A,*A+*B,… … *A+*B+*C+*D+*E 1 2 3 4 5 结论：A B C D E 氨基酸与苯异硫氰酯（PITC）的反应（Edman反应） Edman 降解法(I) Edman 降解法(II) 无冕英雄Pehr Victor Edman 瑞典人, 1916.4.14-1977.3.19 1946-47年在美国留学时想到改进1930 年Abderhalden Brockmann发明的 PITC试剂的反应, 50年发明Edman degradation反应. Acta Chem Scand 4:283 (1950) 1957年移居墨尔本, 远离国际学术中心开始 过隐居生活,1967年研制的自动化仪器可以达到每小时一个氨基酸的速度; 他坚持不申请专利, 给了美国公司得以随便开发仪器的方便. 1972年到德国,77年因脑瘤过世. 由于Edman降解产物需要在紫外域进行检测, 只有HPLC和相应的紫外检测手段进步后才得到普及;60年代后期Moore Stein利用该反应测定了RNase的一级结构, 遗憾的是Edman没有和他们分享Nobel化学奖. 1、肼法 2、还原法 3、酶降解法 肼(hydrazine)法测定 蛋白质与无水肼加热 -------NH-CH-CONH-CH-COOH | | Rx Ry -- + -- + NH-CH-CONH-NH2 + NH2-CH-COOH | | Rx Ry 酶解法末端测序 利用外切蛋白水解酶 (exo-peptidase) 将肽链的氨基酸从N端 (aminopeptidase)或C端 (carboxypeptidase) 一个