第六章：真核生物的遗传分析.ppt

真核生物基因组 真菌类的四分子分析与作图 真核生物重组的分子机制 基因转变及其分子机制 体细胞交换与基因定位 体细胞融合与基因定位 真核生物基因的删除与扩增及重排 如：构巢曲霉 ad，pro，pab，y以及它们的显性等为基因的杂合体。 y隐性纯合子中： pro，pab的纯合子：5.5% pab的纯合子：72% 原养型：22.5 ad纯合子：0 y的相对纯合率为100%，说明y离着丝点最远 说明pro和pab中有一个离着丝点很近 说明pab离y很近，则pro离着丝点很近 说明pab与y之间发生交换的机率是22.5% 说明ad在着丝点的另一侧 ad pro pab y + + + + ad pro pab y + + + + 5.5% ad pro pab y + + + + 72% ad pro pab y + + + + 22.5% ad pro pab y 22.5 72 5.5 (41) (20) (39) 准性生殖（parasexuality）：真菌在二倍体的有丝分裂过程中，偶尔发生同源染色体交换，导致连锁基因的重组，这一遗传变异过程称为准性生殖。 6.6 体细胞融合与基因定位 一、细胞融合与基因定位 细胞融合（cell fusion）：两个或几个体细胞融合成为一个细胞的过程。是体细胞遗传学的核心内容，是应用体细胞遗传学技术进行基因定位的基础。 1958年Okada第一次将两个不同的肿瘤细胞＋仙台病毒（日本血凝病hemagglutinating virus of Japan，HVJ）→体细胞融。 融合后的细胞称为杂种细胞（hybrid cell），它含有两种细胞的染色体。 仙台病毒（sendai virus）在这里是促融因子，UV灭活的仙台病毒介导细胞融合过程，该病毒可进入细胞膜内，在邻近的细胞之间形成细胞质桥（cytoplasmic bridge） 仙台病毒，亦称HVJ，乙型副流感病毒。属副粘病毒属。曾主要应用于细胞工程中的细胞融合技术，基本原理在于HVJ含有细胞表面受体的结合位点，可以促使不同细胞凝聚，最终使细胞膜相互融合。直接产生这种作用的部位是HVJ病毒的外壳，而不是内部的RNA。但是应用HVJ技术有很多缺陷，如细胞感染率低，融合速度慢，反应条件高，融合体的去病毒困难。 聚二乙醇(polyethylene glycol, PEG)：也可显著地提高细胞融合频率，将一定浓度的PEG加入到培养液内，就可使细胞发生凝集。由于PEG是非生物试剂，融合效率高，易于标准化，且价格便宜，因此PEG已成为广泛采用的融合剂，现已取代仙台病毒，它可使细胞膜部分降解，并在细胞间形成细胞质桥，可提高细胞融合的效率。 细胞融合过程可分为异核体（heterokaryon）和杂种（hybrid）细胞形成两个阶段。 在异核体阶段融合的细胞内含有来自两个亲本的细胞核。随后，异核体同步进入有丝分裂，核膜崩溃，来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞。 杂种细胞具有染色体消减（chromosome diminution）现象：随着分裂的不断进行，最初几代中包含了两种亲本细胞的全部染色体，在以后的增殖传代过程中要失落一部分染色体。 例： 小鼠－大鼠杂种细胞丢失大鼠的染色体10％－20％ 人－小鼠杂种细胞丢失人的染色体，最后可能只剩下少数的几条或1条人的染色体。 2、同源染色体配对与联会复合体的形成是两个 独立的过程 突变可以发生在染色体配对或是联会复合体形成的任一过程，并且彼此互不干涉。Zip2突变型中染色体可以配对，但不能形成联会复合体，所以同源染色体之间的识别不依赖于重组或是联会复合体的形成。 在酿酒酵母中，同源染色体之间的特异性联系是由基因HOP2控制的，HOP2的作用是防止同源染色体的相互作用。在hop2突变型中，减数分裂虽然产生正常数量的联会复合体，但每个复合体中含有非同源染色体，这表明，联会复合体的形成不依赖于同源性。 6.4 基因转变及其分子机制 一、异常分离与基因转变 在四分子分析中已知一对等位基因杂交子代的子囊可形成6种正常分离类型： AAAAaaaa或aaaaAAAA AAaaAAaa或aaAAaaAA AAaaaaaAA或aaAAAAaa 这只是四分子中是否发生重组和纺锤体随机取向而形成，两种孢子的比例相等，即等位基因A:a＝4:4。 后来发现有些孢子