正式 微生物的实验室培养文档资料.pptVIP

：提供碳元素的物质。 ①无机碳源：CO2、NaHCO3、CaCO3等 ②有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等 ①构成细胞物质和一些代谢产物 ②有些碳源是异养微生物的主要能源物质 ⑴.概念 ⑵.来源： ⑶.作用： 碳源 氮源 ①无机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。 ②有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等 主要用于合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物。 ⑵.来源： ⑶.作用： 提供氮元素的物质。 ⑴.概念： 无机盐 无机化合物 ⑵.来源： ⑶. 提供除碳源、氮源以外的各种重要元素。 ⑴.概念： ⑶.常见的生长因子： ⑴.概念： ⑵.作用： 微生物生长不可缺少的微量有机物。 酶和核酸的组成成分。 维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。 生长因子 ⑷.来源： 酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等。 微生物培养基 按化学成分不同 天然培养基： 合成培养基： 含用化学成分还不明确的天然物质。如牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基 化学成分完全了解的物质配制而成。如高氏1号培养基、查氏培养基 半合成培养基： 既有天然成分又有纯化学试剂。如马铃薯蔗糖培养基 液体培养基： 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 半固体培养基： 无动力 有动力(弥散) 固体培养基：菌落 按功能不同 选择培养基： 根据某种微生物的特殊营养要求或其对化学、物理因素的抗性而设计的培养基。 鉴别培养基： 培养基中加有能与某一菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而用肉眼就能使该菌菌落与外形相似的其他菌落相区分的培养基叫～。 无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 无菌技术 适用范围 要求 灭菌方法 灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 160－170℃ 1－2h 100kPa 121℃ 15-30min 接种环的灭菌 培养皿、玻璃棒的灭菌 培养基、无菌水的灭菌 实验操作 仪器、设备 制备培养基 结果分析与评价 纯化、接种 二.实验操作(以培养大肠杆菌为例) ㈠.制备牛肉膏蛋白胨培养基 1.计算 2.称量 3.溶化 4.灭菌: 将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。 5.倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。 倒平板操作 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 问题讨论 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 ㈡.纯化大肠杆菌 平板划线法和稀释涂布平板法。 微生物的接种的常用接种方法有： 1.平板划线的操作方法 平板划线的操作 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规则的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 问题讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 2.稀释涂布平板的操作方法 砧板上的微生物 肠黏膜上分布的细菌 微生物的实验室培养 武陟一中东区高二生物组 凉州词 　　 王翰 　　 葡萄美酒夜光杯， 欲饮琵琶马上催。 　　 醉卧沙场君莫笑， 古来征战几人回。 微生物基础知识 实验操作 课题延伸