基于中医“标本兼治”研究益智仁盐炙“温肾缩尿”作用机理-中药学专业论文.docx

成都中医药大学 成都中医药大学 2010 级博士学位论文 - - PAGE 1 - AQP-2 缩略词表 Aquaporin-2 2 型水通道蛋白 AVP Argentifie Vaso Pressin 精氨酸加压素 AR Analytical reagent 分析纯 BUN Blood urea nitrogen 尿素氮 cAMP 13C-NMR Cyclic adenosine monophosphate 13C-Nuclear Magnetic Resonance 环磷酸腺苷 核磁共振碳谱 Cr Creatinine 肌酐 CSAO The Crude Seed Alpiniae Oxyphyllae 益智仁 EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid 乙二胺四乙酸 FAO Fructus Alpiniae Oxyphyllae 益智 Fig. 1H-NMR Figure 1H-Nuclear Magnetic Resonance 图 核磁共振氢谱 HPLC High Performance Liquid Chromatography 高效液相色谱 mRNA Messenger RNA 信使核糖核酸 PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链反应 Rf Retardation factor 相对比移值 RIA radioimmunoassay 放射免疫分析法 rpm Rotation per minute 转/分 SSAO The Stir-heated Seed Alpiniae Oxyphyllae 盐益智仁 Tab. Table 表 TLC thin layer chromatography 薄层色谱 UV Ultraviolet Spectrum 紫外光谱 WB Western blotting 蛋白质印迹 中文摘要 益智为姜科山姜属植物益智 Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实，是中医 临床常用的一味中药。在国家“十一五”期间，基于益智仁“生品入脾，盐炙入 肾，生熟有别”的传统认识，我们对其展开了系统深入的研究，初步阐明了益智 仁“生品入脾·止泻，盐炙入肾·缩尿”中药炮制理论的科学内涵。 目的 本课题在国家自然科学基金面上项目“益智仁‘盐炙入肾-温肾缩尿’的物 质基础和作用机理研究”的支持下，对益智仁温肾缩尿的物质基础 和作用机理进行研究。前期以小鼠水负荷多尿模型为基础，已完成盐益智仁缩尿 有效部位筛选和部分机理研究。本文在前期基础上，建立两种大鼠多尿模型对有 效部位缩尿作用进行验证和评价，并按照中医标本兼治的用药原则，设计“温 肾”为本，“缩尿”为标药理指标，探讨其作用机理。 方法 采用文献学、药理学和化学相结合的手段开展益智仁盐炙“温肾缩尿”作用 机理研究。 1 采用文献学方法，整理回顾益智仁、多尿动物模型的现代研究进展，为实 验研究提供理论依据。 2 采用药理学方法，建立两种大鼠多尿模型，对盐益智仁有效部位缩尿作用 进行验证和评价，并比较盐炙前后作用差异。 3 以肾阳虚多尿模型为基础，从脏器指数、病理形态变化、血清 BUN、Cr 含量和全血 CD3/CD4/CD8 表达等方面探讨益智仁盐炙“温肾”作用；从“抗利 尿激素-环磷酸腺苷-水通道蛋白”信号途径研究“缩尿”作用机制。 4 采用血清药物化学方法，对盐益智仁有效部位“入血成分”进行分离鉴 别，并以其为指标，比较益智仁盐炙前后药代动力学变化，从体内过程变化探讨 益智仁“生熟有别”科学内涵。 结果 1 对水负荷多尿模型大鼠，益智仁石油醚部位在 9 g·kg-1 剂量时能显著降低 其 0～1 h 段尿量（P0.01），延长大鼠的首次排尿时间（P0.05）；盐炙后在 4.5 g·kg-1 时就有显著缩尿作用（P0.01），盐炙前后在 18 g·kg-1 剂量时均能显著降低 水负荷大鼠 6 h 排泄率（P0.05）。对肾阳虚多尿模型大鼠，益智仁石油醚部位 在 9 g·kg-1 剂量时能显著降低其 24 h 尿量（P0.05），盐炙前后无显著差异。 2 益智仁石油醚部位对肾阳虚多尿模型大鼠肾脏、脾脏、胸腺和睾丸指数的 改变有显著抑制作用（P0.05～0.01），对模型大鼠肾脏和睾丸病理损伤有一定 程度的改善，并且可以降低其血清 BUN、Cr 含量，增加外周血 CD 3+ 、CD3+ CD4+ 相对量，降低 CD3+ CD8+相对量，对肾脏指数和病理改变的治疗作用以盐炙品为 佳；益智仁石油醚部位能显著提高肾阳虚多尿模型大鼠血浆 AVP 和 cAMP 含量， 上调 AQP-2 mRNA 和 AVPR-V2 mRNA 在肾髓质的表达，提高 AQP-2 和 A