加热对成骨肉瘤细胞系OS-9901和SOSP-M3的体外灭活作用及加热诱导骨肉瘤细胞系OS-9901的凋亡作用-外科学(骨外)专业论文.docxVIP

独制性声明秉豢学较严谨媳学风与撬良螅辩学遴德，枣^声暖矮皇交麴论交是莪章 独制性声明 秉豢学较严谨媳学风与撬良螅辩学遴德，枣^声暖矮皇交麴论交是莪章 巨等耀播筹下进行蘸研究工作麓取侮鹩磷究磕栗。琢蓑衙鞠，豫了文审符期 段檬注租致谢的地方外，论文IlI不包蛊其他八已经发表或撰写遵的硪究成 嚣毽含本人或地A已巾旗学挂或其德髑途篌煺避蓥壤累。与莪一羁工侔豹弱 l|奉磺究所徽豹{壬籍贡献讶琶程论文巾作了弼爵韵诱明并表示了致谢。 申请学位论文与资科若育不实之处，本A承担一切梗关责任。 论交作者签蔷 舀期：!：!二!：：! 保护知识产权声明 奉A完全了解第琵军鏊大学裔关镖护翮{；l产税韵耩定，邵：研究生征较鞫 莩使搠阍论文I作的知{i{产权单位焉第四军医大学。本人保证毕业离较麟， 茛论文鲮蔑甩论文I作成累鞋譬鍪擎链弱然建繁鲤鼙塞大学。学较育较缣鞠 窆论文豹菱臻粹，允许论文横查褥耩耩褥；学校可谖公布论文的全部鲮部分 擎(保密内容豫外)，可以采用影印、 编印或其他复剜手段缳存论文。 论交揍妻酶趣!j霉舞签嚣 拖皤宇 嚣羯：!：一?二兰 英文缩写词表AGE 英文缩写词表 AGE Agarose gel eletrophoresis 琼脂糖凝胶电泳 Bp Base pairs 碱基对 EDTA Ethylenediarninotetraacetic acid 乙二胺四乙酸 EM Electron microscopy 电镜术 PBS Phosephate buffered saline 碱基盐缓冲液 AO Acridine orange 丫啶橙 DMSO dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 SDH immunohistochemistry 琥珀酸脱氢酶 OSA 0steosarcoma 成骨肉瘤 加热对成骨肉瘤细胞系0S--9901和SOSP--M3的 加热对成骨肉瘤细胞系0S--9901和SOSP--M3的 体外灭活作用及加热诱导骨肉瘤细胞系0S--9901 的凋亡作用 研究生 单乐群 导师 范清宇 第四军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所 中文摘要 ／成骨肉瘤(ostcosarcoma)是骨的原发性恶性肿瘤，占所有恶性肿瘤 的0．2％，每年每百万人口将有2—3例的成骨肉瘤患者发病。大多数患 者的发病年龄为lO一20岁。传统的治疗方法预后差，5年生存率不足20 ％。近年来随着新的化疗、热疗及免疫治疗的兴起，使成骨肉瘤的5年 以上生存率大为提高。 随着高温治疗恶性肿瘤的应用愈加广泛，对成骨肉瘤的体内外热疗 也做了大量的研究，但由于组织块的热疗条件难以准确控制，在加热方 法的可靠性以及瘤细胞的灭活效果、机理和预后等问题还存在着一定的 疑问，为此我们采取肿瘤细胞体外加温加热的方法进一步探讨热疗对恶 性骨肿瘤细胞的灭活作用及其部分机理。 目的 1．探讨两株不同转移活性的成骨肉瘤细胞的体外灭活最佳温度及时间。 2．探讨热疗诱导成骨肉瘤细胞凋亡，为中低温度热疗治疗成骨肉瘤提供 理论依据。f方法 理论依据。 f方法 1．不同温度不同时间对OS一9901和SOSP．M3成骨肉瘤细胞系加热作用 后，用MTT法测定琥珀酸脱氢酶(irmnunohistochemistry,SDH)活性以 及用肿瘤干细胞集落形成法测定集落形成能力。 2．用透视电镜观察43．5℃lh热疗后不同时间组OS一9901成骨肉瘤细胞 系的形态，了解热疗对凋亡中的细胞超微结构的影响。 3．应用DNA凝胶电泳了解43．5℃lh热疗对OS．9901成骨肉瘤细胞系的 生化影响。 4．通过免疫组织化学染色，观察43．5℃lh热疗对OS．9901成骨肉瘤细 胞系的p53、bcl．2蛋白表达的影响。 结果 1．两株不同转移性的成骨肉瘤细胞系对热的敏感性是一致的。 2．成骨肉瘤细胞的SDH活性随着温度升高和时间延长而降低。 3．随着加热温度的升高及加热时间延长肿瘤干细胞的集落形成能力不 断下降，45℃60min或46C 30rain以上时成骨肉瘤细胞基本无集落 形成能力。 4．电镜下43．5℃lh作用的成骨肉瘤细胞继续培养12h后出现大量异常 细胞，可见典型凋亡特征性形态改变：包膜出芽，芽内可见核物质。 包核固缩，染色质边集，核膜破裂崩解，内质网肿胀、崩溃、自溶， 可见凋亡小体。 5．电泳可见43．5C lh作用的成骨肉瘤细胞继续培养12h后细胞DNA 形成了梯形电泳模式，这是发生凋亡的标志。空白对照组未见明显的凋亡降解片段。 形成了梯形电泳模式，这是发生凋亡的标志。空白对照组未见明显的 凋亡降解片段。 6．免疫组织化学显示，43．5。C lh作用的成骨肉瘤细胞Bcl．2的表达在 12小时较对照组无明显减少。P53的的表达在12小时较对照组明显 增加。j 结论 1．50。C 30min可以作为成骨