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纸上色谱分离装置 1. 层析筒 2. 滤纸 3. 原点 4. 展开剂 5. 前沿 6、7. 斑点 展开方式 上行法：展开速度慢、容易达到平衡，分离效果好 下行法：展开速度快、适用于易分离的组分分离 双向法：使用两种展开剂、90度展开、适用于难分离的混合物的分离 径向层析：圆形滤纸，2个培养皿，适用于Rf相差较大 的组分的分离。 比移值 比移值：Rf＝a／b a为斑点中心到原点的距离cm b为溶剂前沿到原点的距离cm Rf值最大等于1 ，最小等于0 Rf值是衡量各组分的分离情况的数值 Rf值相差越大，分离效果越好 使用Rf值定性；扫描光谱定性 应用 甘氨酸、丙氨酸和谷氨酸混合氨基酸的分离 展开剂：正丁醇：冰醋酸：水＝4：1：2 显色：茚三酮 葡萄糖、麦芽糖和木糖混合糖类的分离 展开剂：正丁醇：冰醋酸：水＝4：1：5 显色：喷硝酸银氨溶液，出现Ag的褐色斑点。 定性：葡萄糖的Rf为0.16，麦芽糖的Rf为0.11,木糖的Rf是0.28。 薄层色谱法的特点 设备简单，操作方便。 混合物的分离情况可观察，可保存。 比纸色谱快速。薄层色谱一般只需十几分钟或几十分钟。 使用无机吸附剂，薄层色谱可以采用腐蚀性的显色剂。对于难以检出的化合物，可以喷以浓硫酸，然后小心加热，使有机物碳化，显棕色斑点。 固定相的选择，比纸色谱更灵活。流动相的选择，比气相色谱灵活。 薄层色谱法的特点 比纸色谱法斑点的扩散作用小，斑点比较密集，检验灵敏度较高。 适于分析小量样品(一般到微克级)，也适于大量样品的分离（可以分离出几毫克甚至几十毫克组分）。 适于分析热不稳定，难挥发的样品。 方法原理 原理： 薄层色谱分离法是将固定相吸附剂均匀地涂在玻璃上制成薄层板，试样中的各组分在固定相和作为展开剂的流动相之间不断地发生溶解、吸附、再溶解、再吸附的分配过程。不同物质上升的距离不一样而形成相互分开的斑点从而达到分离。 操作方法：同纸上色谱法 展开方法 展开缸和展开槽展开 固定相和展开剂 1. 固定相： （1）硅胶：微酸性极性固定相，适用于酸性、中性物质分离（可以制备成酸度不同或碱性硅胶扩大使用范围） （2）氧化铝：碱性极性固定相，适用于碱性、中性物质分离（可以制备成中性或酸性氧化铝扩大使用范围） （3）聚酰胺：含有酰胺基极性固定相，适用于酚类、醇类化合物的分离 （4）纤维素：含有羟基的极性固定相，适用于分离亲水性物质 硅胶GF254 ：硅胶中既含有煅石膏（G表示）又含荧光指示剂（F表示） ，在254nm紫外光照射下呈黄绿色荧光。 根据制备方法不同，吸附剂又可以分为不同的活性，如：硅胶和氧化铝可以分为五级 展开剂 展开剂对被分离物质有一定的解吸能力和溶解度。 吸附剂和展开剂的一般选择原则是： 非极性组分的分离选用活性强的吸附剂，用非极性展开剂； 极性组分的分离，选用活性弱的吸附剂，用极性展开剂。 实际工作中要经过多次实验来确定。 应用 硅胶G(含煅石膏作粘合剂)薄层，适当展开剂分离各种有机磷农药。 用硅胶G薄层，以丙酮—氯仿〔6：94)为展开剂，分离和测定食品中黄曲霉B1等致癌物质。 定性： Rf值；板上化学反应；斑点的紫外或可见吸收光谱图； TLC-付里叶变换IR联用等。 定量方法：刮下洗脱；薄层扫描；目视半定量。 讨论： Rf与组分性质、流动相及溶解度有关。 极性组分→易保留，Rf 小 （流动相极性↑, Rf↑） 非极性组分→易流出，Rf大 （流动相极性↑, Rf↓） 点 样 要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展。 采用多次点加法，第二次点加时应待前一次点加的溶剂挥发后再进行。 点样量应适中，过载会引起斑点拖尾，分离度变差，以最小检测量的几倍～几十倍为宜。 手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 –5ul），微量注射器。 展开方式 多数采用直线形上行展开，薄层板水平角度以75? 为最佳。展开距离一般为10-15cm。 多次展开——一次展开未达满意分离时，可将薄层板干燥后再次用同一种溶剂展开，可重复多次，直到混合物分离为止。 分步展开——混合物性质差别较大时，一种流动相不能有效分离时，可用不同溶剂依次展开不同距离。 连续展开——使到达薄层上缘的溶剂不断蒸发，连续展开以增加展开距离。因无溶剂前沿，需要有个参照物同时展开，以计算相对保留值。 二维展开——在两个垂直的方向上进行展开。将样品点在薄层板的一个角上，展开适当距离后，挥干溶剂，再将薄层板以与原展开方向成90 ? 的方向进行展开。 增强 15 20 Ⅴ 10 15 Ⅳ 6 12 Ⅲ 3 10 Ⅱ _ _ Ⅰ 氧化铝 硅胶 吸附力 含水量（％） 活度级别 硅胶、氧化铝活度分级及其与含水量的关系 增强 流动相选择时需考虑的情况 一些溶剂如氯