家蝇蛆粉对ApoE--小鼠抗动脉粥样硬化作用及其机制的探讨-病原生物学专业论文.docxVIP

中文摘要 中文摘要 广东药学院硕士研究生学位论文 广东药学院硕士研究生学位论文 I I II II 家蝇蛆粉对 ApoE-/-小鼠抗动脉粥样硬化 作用及其机制的探讨 硕士研究生： 肖明 珠 专 业： 病原生物学 导 师： 朱家勇教授 中文摘要 动脉粥样硬化(atherosderosis，AS)指动脉及其分支的脉管壁内膜及内膜下的脂质 沉着，同时伴有中层平滑肌细胞移行至内膜下增殖，使内膜增厚，形成黄色或灰黄色 状如粥样物质的斑块。动脉粥样硬化可导致心脑血管疾病，严重危害人类的健康。我 国动脉粥样硬化及其引发的心脑血管疾病发病率逐年上升，且发病呈“年轻化”的趋 势。动脉粥样硬化已为医学界所重视，但是其治疗的药物疗效有限且需要长期使用。 目前，临床上广泛使用的抗动脉粥样硬化药物如辛伐他汀、普罗布考等均存在不容忽 视的毒副作用，其长期疗效在临床上也备受质疑。因此，寻找天然、无毒、有效的抗 动脉粥样硬化药物是临床药学的研究热点之一。 家蝇蛆（Housefly maggot, HM）含有多种活性肽，已被证实有降低胆固醇，提高 机体免疫能力，降血压等作用。从上个世纪 80 年代至今，家蝇抗菌肽、甲壳素等生 物活性物质的研究一直是生命科学研究领域的热点之一。我们的前期结果显示，家蝇 蛆粉能够有效降低高脂血症 SD 大鼠的血脂水平，并对 SD 大鼠动脉粥样硬化也有一 定的预防作用。为进一步探讨家蝇蛆粉的抗动脉粥样硬化作用，本实验以国际公认的 动脉粥样硬化模型——ApoE 基因敲除（ApoE-/-）小鼠为研究对象，从降血脂、抗氧化 等方面来探讨家蝇蛆粉的抗动脉粥样硬化机制。 研究方法： 1 ApoE 基因敲除（ApoE-/-）小鼠分组和用药处理：繁殖鉴定 ApoE-/-小鼠，随机分 组，分为模型对照组、家蝇蛆粉处理（8g/kg/day）组、辛伐他汀处理（50mg/kg/day） 组；ApoE-/-小鼠具有 C57BL/6J 小鼠遗传背景，故设一组 C57BL/6J 小鼠以做正常 空白对照。为探讨家蝇蛆粉的抗氧化机制，以临床常用抗氧化类治疗动脉粥样硬 化药物普罗布考（30mg/kg/day）设一处理组以做阳性参照。各组小鼠予灌胃用药 处理，模型对照组和空白对照组则予灌胃生理盐水处理。 2 家蝇蛆粉对 ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的预防及治疗效果探讨：每组小鼠用药处理 8 周后，以辛伐他汀处理组做阳性参照，分别检测其主动脉和腹主动脉油红 O 染 色斑块百分比，心脏三尖瓣部位病理切片油红-O 染色斑块面积，主动脉横切面病 理切片 Elastin Van Gieson（EVG）染色观察弹性纤维增生情况等，并对数据进行 统计分析。 3 家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化的降血脂机制探讨：每 14 天检测各组 ApoE-/-小鼠的胆 固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平，以辛伐他汀处理组做阳性参照，观察家蝇蛆 粉的降血脂效果。同时测定小鼠胆汁流量和胆汁酸含量，检测 HMG-CoA 还原酶 活性，以探讨家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化的降血脂机制。 4 家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化的抗氧化机制探讨：每 14 天检测各组 ApoE-/-小鼠的高 密度脂蛋白（ HDL）、低密度脂蛋白（ LDL）水平，以普罗布考处理组做阳性参照， 观察 家 蝇蛆粉的抗氧化效果。 同时 于 用药 8 周 后 检测 小鼠 血 丙二醛 （malonyldialdehyde，MDA）和氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）水平，并检测各组 小鼠心脏三尖瓣粥样斑块中巨噬细胞特异表达蛋白 MAC-3，了解巨噬细胞分布情 况，以探讨家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化的抗氧化机制及其与巨噬细胞迁移的相关性。 实验结果： 1. 家蝇蛆粉对 ApoE-/- 小鼠动脉粥样硬化的预防及治疗效果探讨：预防试验中，模型 对照组和家蝇蛆粉预防组间的主动脉和腹主动脉部位动脉粥样硬化斑块面积百分 比平均值存在非常显著差异（21.34%，13.58%，P0.01），两组间的心脏三尖瓣 部位动脉粥样硬化斑块面积平均值同样存在非常显著差异（216272.27±28649 μm2，131998.17± 24165μ m 2 ，P0.01）。而在治疗试验中，模型对照组和家蝇蛆粉 治疗组间的主动脉和腹主动脉部位动脉粥样硬化斑块面积百分比平均值也存在非 常显著差异（22.53%，15.91%，P0.01），两组间的心脏三尖瓣部位动脉粥样硬 化 斑 块 面 积 平 均 值 同 样 存 在 显 著 差 异 （ 283423.83±34649μm2 ， III III i i 236272.2347±36749μm2，P0.05）。另外，对 ApoE-/-小鼠主动脉横切面组织病理 切片进行 Elastin Van Gieson（EVG）弹性纤维特异染色结果显示，预防和