急性低氧对大鼠空腹血糖的影响-内科学(内分泌病)专业论文.docxVIP

青海大 青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文 第 第 PAGE 10 页 共 23 页 第一章 前 言 近年，随着西部地区社会经济的迅速发展，吸引着越来越多的外来人口进入青藏 高原。因此了解急进高原后低氧环境对机体糖代谢及其调节功能的影响对保障人民群 众的身体健康及高原地区的社会经济的发展是很重要的。 我国青藏高原平均海拔4500m，是低压缺氧与寒冷并存的自然环境地区，人从平 原进入高原为适应低氧环境机体需要进行一些适应性的改变，如红细胞增多、血红蛋 白的升高、交感肾上腺系统的兴奋等。急性缺氧所引起的摄食量减少，葡萄糖的有氧 氧化通路受阻而无氧糖酵解水平相对增强，因而表现出血糖水平降低、血乳酸水平升 高等趋势。血糖水平主要受胰岛素和胰高血糖素的调节，葡萄糖的吸收、转运主要依 赖葡萄糖转运体的转运，因此葡萄糖转运体的数量和功能对葡萄糖的吸收和代谢有重 要影响。目前国内外相关研究显示：急进高原2000m低氧条件下大鼠胰岛素分泌无明 显影响，而当升至5000m低氧条件下大鼠胰岛素分泌受到了抑制，并且这种抑制现象 呈现出时间的依赖性［1］；GLUT1广泛存在于组织中，是哺乳动物葡萄糖转运体研究最 广泛的一个［2］。GLUT4受胰岛素的调节，主要分布于骨骼肌、心肌、脂肪等对胰岛素 敏感的组织中［3］。而低氧对葡萄糖转运体的影响与暴露于低氧的时间长短有重要的关 系［4-5］。 本实验以Wistar大鼠作为研究对象，分为低氧组和对照组各15只，低氧组进入低 压氧舱(海拔参数5000m，氧浓度10.8％，54.02Kpa)，饲养一周，期间用血糖仪检测 大鼠空腹12h血糖。一周后采集血清、肝脏、后肢股四头肌。将肝脏及后肢股四头肌 固定，石蜡包埋,制作切片。用Elisa法测定大鼠血清胰岛素、胰高血糖素水平，采用 免疫组化SP法测定大鼠肝脏检测GLUT1和骨骼肌GLUT4。籍以了解急性缺氧对大鼠血 糖、血清胰岛素、胰高血糖素水平的影响及肝脏和肌肉组织中葡萄糖转运体表达的变 化，来探讨急进高原后低氧环境对机体糖代谢及其调节功能的影响，并进一步对大多 数暴露于高原低氧环境下的人群保健提供合理的指导作用。 第二章 材料与方法 材料 清洁级 7-8 周龄雌性 Wistar 大鼠 30 只，体质量（170±10）g，购于青海省地方病 研究所。 基础饲料配方符合中华人民共和国国家标准，所含营养素和能量能保证大鼠生长 发育的基本要求。基础饲料（蛋白质21%、碳水化合物55%、脂肪6%、总热量15.36KJ/g） 由青海省地方病研究所提供。大鼠胰岛素Elisa检测试剂盒、大鼠胰高血糖素Elisa检测 试剂盒购于上海博谷生物公司，GLUT1、GLUT4单克隆抗体及免疫组化试剂盒购于英国 abcam公司，德国拜耳公司拜安捷2代血糖分析仪、青海大学高原医学中心低压氧舱（中 航工业贵州风雷航空军械公司）、上海安亭科学仪器厂TGL-16B高速离心机、美国莱卡 LEICARM2255切片机，日本Olympus Vanox多功能显微镜。 方 法 2.2.1 实验动物的饲养及分组 所有实验动物均单笼饲养，喂以基础饲料。自由摄食（基础饲料）、摄水，动物房 温度（22±5）℃，相对湿度（50±10）％，明暗周期 1：1。基础饲料喂养十八周后， 随机分为 2 组：对照组 15 只，低氧组 15 只（268.73±32.30g,267.27±24.56g，无统 计学差异 P＞0.05）。迅速将低氧组大鼠置于低压氧舱中，设置参数海拔为 5000m（氧浓 度 10.8％，54.02KPa），放置一周。观察大鼠每日的活动及摄食情况。并分别于进氧舱 后 1 天、2 天、3 天、5 天、7 天时用拜耳血糖仪（拜安捷 2 代）测大鼠空腹 12h 血糖， 测大鼠进氧舱前及出舱后的体重。对照组大鼠置于海拔 2260m 的低压氧舱外。 2.2.2 标本取材及处理 所有大鼠在禁食12小时后，以乌拉坦（0.4g/kg）腹腔麻醉，在无菌状态下打开腹腔， 腹主动脉取血，离心（3000rmp）10min，取血清置于-80℃冰箱备检。迅速取出大鼠肝 脏、后肢股四头肌肉组织，放入10%甲醛溶液中固定保存，制作石蜡切片。 2.2.3 血清胰岛素、胰高血糖素的检测 血清胰岛素和胰高血糖素的检测采用 Eilsa 法。将血清于-80℃冰箱中取出置于 -20℃冰箱 24h、4℃冰箱 24h 后，室温下严格按照试剂盒说明书操作检测： ①.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃ 冰箱。②.设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 50μL，标准孔加标准 品 50μL，待测样品孔先加样本 10μL，再加样本稀释液 40μL。③.标准孔和样品孔中 每孔加入辣根过氧