家蚕追寄蝇寄生家蚕血液差异蛋白组学的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 A Thesis Submitted in Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Science Differential proteomic analysisin Haemolymph of Bombyx mori induced by the larva of Exorista sorbillans Wiedemann parasite infection Submitted by Gao Li Supervised by Professor Xu An Ying Jiangsu University of Science and Technology April, 2014 江苏科技大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论 文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文 的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本 人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 2014 年 4 月 25 日 IV 江苏科技大学学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定， 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版， 允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏科技大学可以将本学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于： 。(1)保密，在 年解密后适用本授权书。 (2)不保密 。 学位论文作者签名： 指导教师签名： 2014 年 4 月 25 日 2014 年 4 月 25 日 摘要 摘要 摘要 家蚕追寄蝇(Exorista sorbillans)寄生于家蚕幼虫体壁与肌肉间引起的多化 性蚕蛆病对蚕业生产危害极大。近几十年来，关于家蚕追寄蝇的研究多集中在生 物学和防治等方面，对家蚕追寄蝇寄生后的家蚕体内生理生化变化方面研究较 少，从分子水平上探究家蚕追寄蝇寄生对家蚕生长与发育进程和分子免疫应答机 制更是空缺，因此本文主要从核酸和蛋白质水平研究蝇蛆寄生后对家蚕生长发育 与分子免疫的影响，以期阐述寄生后的家蚕生长发育、免疫应答等生物学问题， 寻找家蚕蝇蛆病防治的切合点，为提高蚕桑生产的经济效益和抗病育种等提供重 要的参考。研究结果如下： 1、家蚕追寄蝇寄生对家蚕危害调查及寄生部位观察 追寄蝇寄生后家蚕的死亡率调查结果显示，4龄初期和5龄初期寄生的家蚕大 部分死亡，4龄3天、5龄3天和5龄4天寄生的家蚕死亡率显著降低。观察并记录了 家蚕追寄蝇寄生蚕体后寄生部位随发育时间的变化而呈现的不同特征。对即将出 蛆的蚕体进行解剖，可观察到寄生在蚕体内的蛆；羽化后的解剖观察，发现包裹 物（体）将寄生的蛆体包围并致其死亡。 2、家蚕追寄蝇寄生蚕体血液的蛋白组学研究 5龄第1天的家蚕被追寄蝇寄生后，对5龄第4天、5龄第6天、化蛹第2天、化 蛹第4天 和化蛹 第6天寄生家 蚕血液 和正常情 况下对 应时期 家蚕血 液进行了 SDS电泳，结果显示：化蛹第2天的家蚕血液蛋白组分和其他时期相比变 化显著，且在这个时期家蚕停止食桑，家蚕追寄蝇和家蚕生长发育所需的能源物 质均来自家蚕本身储存的能源物质。因此采用被寄生的家蚕化蛹第2天和正常情 况下对应时期的家蚕血液为材料，构建了寄生组和对照组血液的双向电泳图谱， 应用质谱技术成功鉴定的差异蛋白点有49个，其中上调表达的有35个蛋白点，下 调表达有14个蛋白点，在上调表达的蛋白质中，有3个与家蚕免疫相关的蛋白质 —肽聚糖识别蛋白-S1、C-型凝集素-10和酚氧化酶-2；下调表达的蛋白质中有与 家蚕生长发育相关的蜕皮激素调节蛋白前体。研究结果表明，当追寄蝇寄生于蚕 体后激活了家蚕的先天免疫系统，同时也影响了家蚕的生长发育。 利用 GO 分类对鉴定到的蛋白进行功能分析：49 个蛋白质中 37 个蛋白质获 得至少一个 GO 号，这些蛋白质被分为三大类，主要参与细胞成分、分子功能和 生物过程。对这些蛋白质进行 KEGG(K yoto Encyclopedia of Genes and Genomes) pathway 分析，他们主要分为代谢，遗传信息处理，环境信息处理，细胞过程， 有机体系统和人类疾病五大类。它们具体主要参与蛋白吸收和消化、碳水化合物 代谢、解毒代谢及免疫反应过程等。 I 江苏科技大学硕士论文 江苏科技大学硕士论文 3、实时荧光定量 PCR 验证分析 对于双向电泳得到的差异蛋白，我们选取了几个关键蛋白—肽聚糖识别蛋白 -S1、C-型凝集素-10