第十二章遗传信息的传递与表达.pptVIP

第十二章 遗传信息的传递与表达;中心法则 ; 在某些情况下RNA也可以是遗传信息的基本携带者，例如RNA病毒能以自身核酸分子为模板进行复制。 致癌RNA病毒还能通过逆转录(Reverse transcription)的方式将遗传信息传递给DNA。 1958年Crick将生物遗传信息的这种传递方式称为中心法则。 ;第一节 DNA的复制 ;一、DNA复制过程有关的酶 ;1，DNA聚合酶 ;(1)大肠杆菌DNA聚合酶 ;大肠杆菌DNA聚合酶I的活性中心 ;大肠杆菌DNA聚合酶I的5′→3′核酸外切酶活力 ;(2)真核生物的DNA聚合酶 ;2，DNA连接酶（ligase） ;反应分三步进行。首先由NAD或ATP与酶反应，形成腺苷酰化的酶(酶-AMP复合物)，其中AMP的磷酸基与酶的赖氨酸的ε-氨基以磷酰胺键相结合。然后酶将AMP转移给DNA切口处的5′?磷酸，以焦磷酸键的形式活化，形成AP-P-DNA。然后通过相邻链的3′?OH对活化的磷原子发生亲核攻击，生成3′,5′?磷酸二酯键，同时释放出AMP ;3，DNA引物酶 ;4，与DNA解旋和解链有关的酶 ;（1）拓扑异构酶;;拓扑异构酶II又称DNA旋转酶(gyrase)，它可连续引入负超螺旋到同一个双链闭环DNA分子中去，反应需要由ATP供给能量。在无ATP存在时，旋转酶可松弛负超螺旋，但不作用于正超螺旋。;（2）DNA解螺旋酶(helicase) ;（3）单链结合蛋白 ;二、DNA的复制过程 ;DNA复制的要点 ;2、DNA的半不连续复制 ;另一条模板链是5′→3′走向，在其上DNA也是从5′→3′方向合成，但是与复制叉移动的方向正好相反，所以随着复制叉的移动，形成许多不连续的片段（称为冈崎片段），最后连成一条完整的DNA链，该链称为滞后链。这种前导链连续复制，滞后链不连续复制的方式称为DNA半不连续复制。 ;冈崎片段的合成需要RNA引物。RNA引物是在DNA模板链的一定部位合成并互补于DNA链，合成方向也是5′→3′，催化该反应的酶称为引物合成酶。 引物的长度通常为几个核苷酸至10个核苷酸。RNA引物的消除和缺口的填补是由DNA聚合酶I来完成的。最后由DNA连接酶将冈崎片段连成长链。 ;3，DNA复制的基本过程 ;DNA复制的起始 ;DNA复制的起始 ;DNA聚合酶能催化3′-OH端与dNTP形成3′,5′-磷酸二酯键，使新生链不断延长，但不能催化两个dNTP间形成磷酸二酯键。DNA在???制时，先在复制区的模板链上合成一段RNA引物，提供聚合酶3′-OH，然后在DNA聚合酶催化下合成新生链，合成引物的过程称为引发。 ;DNA链的延伸 ;复制的终止 ;三、DNA的损伤与修复 ;1，光复活修复 ;光修复酶结合到嘧啶二聚体上，吸收蓝光光子，通过电子转移，使环断裂，恢复正常的碱基配对结构。 ;2，碱基切除修复 ;3，错配修复 ;四、RNA指导下的DNA合成 ;1，RNA病毒与逆转录酶 ;2，逆转录酶的作用机制 ;新生的DNA链与模板3′端R配对互补，5′→3′方向继续合成DNA负链，直到模板的5′端。 RNA酶H以新合成的DNA链为模板合成DNA正链，并降解tRNA。 此时，发生第二此跳跃，负链3′端引物结合序列与新合成的正链3′引物结合部位配对互补，以负链为模板合成全长的正链。再以全长的正链为模板，补充合成3′端的序列。;病毒携带的整合酶（integrase）与双链DNA结合并除去两条DNA链3′-末端各两个核苷酸，使双链末端成为5′-端突出的粘端。 病毒DNA与整合酶的复合物又与宿主DNA结合，整合酶随机切割宿主DNA链，使5′-端产生突出的4～6个核苷酸的粘端，病毒DNA与宿主DNA末端对接，并由宿主的酶系统将末端修补连接。病毒DNA就这样随机整合到宿主基因组中。 ;第二节 DNA指导下的RNA合成 ;一、核糖核酸的酶促合成 ;在体外，RNA 聚合酶能使DNA的两条链同时进行转录，但在体内，DNA分子的两条链仅有一条链可用于转录；或者某些区域以这条链转录，另一些区域以另一条链转录；对应的链只能进行复制，而无转录的功能。 在RNA聚合反应中，RNA聚合酶以完整双链DNA为模板，DNA碱基顺序的转录是全保留方式，转录后，DNA 仍然保持双链的结构。虽然转录时，双链结构部分的解开，但天然的（双链）DNA作为模板比变性的（单链）DNA更有效。;二、RNA聚合酶及转录因子 ;目前已知的真核细胞RNA聚合酶有3种，它们在结构上具有极大的相似性，都是由两个大亚基和多个小亚基构成，3种酶的大亚基的氨基酸序列有同源性，某些小亚基为3种酶共有。 RNA聚合酶在结构上虽有相似性，但分工不同，RNA聚合酶I负责转录出rRNA前体（前体中不包括5S rRNA ）；RNA聚合酶II转录编