己酮可可碱对高脂饮食大鼠NASH的干预作用及其机制-内科学专业论文.docxVIP

复旦人学硕士学位论文 复旦人学硕士学位论文 己酮可可碱对高脂饮食人鼠NASH的干预作用及其机制 中文摘要 当前，非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)已成 为一种重要的肝病，包括单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)和肝硬化。NAFLD／NASH通常是以胰岛素抵抗为基础的 代谢综合征累及肝脏的表现，氧应激、肿瘤坏死因子一Ⅱ(mmor necrosis factor- q，TNF。n)等细胞因子促进NASH的发生和发展。近来研究表明，TNF．。抑制 剂己酮可可碱(pentoxifyliine，PTX)可改善NASH患者临床症状、血清转氨酶 水平和胰岛素敏感性，并显著提高重症酒精性肝炎患者的短期生存率，但其作用 机制鲜见报道。本实验即探讨PTX对高脂饮食大鼠NASH的干预作用，应用基因 芯片技术对肝组织基因表达谱的变化进行检测，以探讨PTX作用的分子机制，并 初步探讨PTX对肝脏胰岛素抵抗相关的核因子一K B(nuc]ear factor—K B， NF—K B)信号通路和胰岛素受体底物(insulin receptor substrates，IRS)的作 用。 第一部分PTX对高脂饮食大鼠NASH的干预作用 目的探讨PTX对高脂饮食大鼠NASH并肝纤维化模型形成的影响。方 法24只SD大鼠高脂饮食饲养4周后，随机分为模型组和干预组(100mg／kg／d)， 于实验第24周处死，并设普通饮食饲养大鼠6只作对照。常规检测血清转氨酶、 血脂并作肝组织病理学检查。ELISA法检测血清TNF—d的变化，化学比色法检测 肝匀浆还原性谷胱甘肽(glutathione，GSH)、丙二醛(malonyl．dialdehyde，MDA)、 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活力的变化。结果与模型组相 比，干预组肝纤维化积分和组织学炎症活动指数显著下降(分别为0．90-4-0．31 旧1．42±O．51，P0．05：1．10±0．38 VS 4．83±1．05，P0．01)伴肝细胞脂肪变 性程度改善(秩和检验P0．05)。干预组血清TNF。a水平较模型组显著降低 (11．24-t-5．01pg／mlⅧ22．53±11．79pg／ml，PO．05)，伴肝组织MDA含量减少 (PO．05)，而GSH含量增加(PO．05)。然而，两组间血脂和血清转氨酶等 生化指标无明显差异。 结论PTX可能通过抑制TNF—n生成和氧应激／脂质过 氧化损害，从而有效防治高脂饮食大鼠肝内炎症和纤维化的形成。 第二部分PTX对NASH大鼠肝脏基因表达谱的影响 目的探讨PTX对NASH大鼠肝脏基因表达谱的影响。 方法应用含 15650余条基因的大鼠U230A芯片检测肝脏基因改变。其中TNF—O、TNF．n 1 型受体(TNFRl)、CDl4、转化生长因子一B 1(transforming growth factor-B 1，TGF 复黾大学硕七学位论文 复黾大学硕七学位论文 己酮可可碱对高脂饮食大鼠NASH的干预作用及其机制 0—1)mRNA表达用RT实时PCR加以验证。 结果与模型组相比，干预组出 现差异表达的基因共370条，其中模型组与对照组相比上调而PTX干预后下调 的基因57条，模型组与对照组相比下调而PTX干预后上调的基因25条，主要 涉及炎症／免疫反应相关基因、细胞信号转导相关基因、细胞外基质和细胞黏附 分子基因、糖脂代谢和生物转化相关基因、离子通道／运输蛋白基因等。干预组 TNF—Q、CDl4和TGF B．1的表达较模型组显著下调(P均O．01)。结论PTX 可能通过影响NASH大鼠肝脏多种结构和功能基因的差异表达，从而有助于脂 肪性肝炎及肝纤维化的防治。 第三部分PTX对NASH大鼠肝脏NF—K B信号通路的影响 目的研究PTX对NASH大鼠肝脏NF．K B信号通路及与肝脏胰岛素抵抗 相关的IRS一1、IRS一2和葡萄糖转运子2(glucose transporter,GLUT2)表达的影 响。方法用电泳迁移率分析检测肝组织NF—K B活性，Westemblot检测TNF． a和I KB Q蛋白表达，RT—PER法检测肝组织IRS．1、IRS．2和GLUT2mRNA表 达。 结果与对照组相比，模型组NF—K B活性明显升高，而干预组与模型组 相比NF—KB活性降低。模型组与对照组相比，n盯一q表达显著增加，I K B