课件：第十一：临床检验学基础第讲授教师熊立凡概论.ppt

性别基因诊断 目的：羊水细胞性别检查复杂，干扰因素多。基因诊断可提高正确性、可靠性。性别基因诊断最常用方法 Y特异DNA探针 Y染色体特异的SRY基因区域（sexdeterminating region of Y chromosome） 聚合酶链反应(PCR) 目前认为，SRY是睾丸决定因子的最佳候选基因 神经管缺陷产前诊断1．甲胎蛋白(AFP)测定：神经管缺陷产前诊断最常用方法 来源 AFP主要在胎儿肝脏和卵黄囊合成，部份来自胎儿胃肠道、羊膜及绒毛膜细胞，随胎儿尿液排入羊水 正常妊娠 16～20周羊水中达40mg/L 20～22周逐步下降 32周后降至25mg/L至妊娠足月 无脑儿、脊柱裂等开放性神经管缺陷胎儿 胎儿血AFP是羊水AFP的150～200倍。 患儿：可使羊水中AFP含量高于正常妊娠羊水中10倍以上。 母血筛查 诊断开放性神经管缺陷，准确率90%以上 其他AFP增高疾病 胎儿脑积水、先天肾脏病及糖尿病，先兆子痫等所致胎盘功能不足、流产、死胎等 2．羊水胆碱酯酶测定 羊水总胆碱酯酶测定(total cholinesterase，TChE) 正常妊娠 妊娠12周，羊水ChE活性明显增高 开放性神经管缺陷胎儿 胎儿脑脊液和血液：直接渗入羊水，羊水ChE活性明显增高。 羊水真性胆碱酯酶测定(actual cholinesterase，AChE) 检测方法 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。 筛诊阳性率可达到99.5% 活性增高 有助于确诊胎儿开放性神经管畸形。 其他：严重先天畸形、流产、胎儿脐疝等 粘多糖沉积病产前诊断 发病机制 细胞溶酶体酸性水解酶先天性缺陷 临床表现 肝脾肿大、智力障碍、骨骼畸形等 最佳方法 测定培养羊水细胞内酸性水解酶活性 常用方法 甲苯胺蓝定性试验 正常妊娠早期：弱阳性 正常妊娠中、后期：阴性。 阳性：提示胎儿患有粘多糖沉积病 糖醛酸半定量试验 肌酐中糖醛酸含量反映酸性粘多糖的多少 正常妊娠16～20周：含量为3.3～7.0mg/mgCr。 增高：提示胎儿患粘多糖沉积病 胰腺纤维囊性变产前诊断 γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）测定 产前早期诊断胰腺纤维囊性变的最佳指标 正常妊娠 14～15周：为母体血清10～100倍。随着胎龄增长，γ-GT 活性逐渐下降。 30～40周：为妊娠15周的1/40。 胰腺纤维囊性变胎儿 妊娠15周，羊水γ-GT 活性明显降低 其他疾病 21三体或18三体综合征畸胎 碱性磷酸酶(ALP)测定 正常妊娠 19周左右，ALP活性最高。 29周后ALP活性稳定在产前水平。 胎儿胰腺囊性变 ALP活性明显降低 羊水细胞内酶分析先天性代谢缺陷病：系因基因突变导致某种酶的缺失多数先天性代谢缺陷病：尚无有效的治疗方法（除苯丙酮尿症、肝豆状核变性等可通过控制饮食和药物治疗外） 分子生物学技术在产前诊断中应用DNA探针技术：单股DNA小片段以放射性同位素、酶、荧光素或化学发光物标记后，同被检DNA中的同源互补系列杂交，从而检出所要查明的DNA（基因）。 常用检测基因方法 1．核酸分子杂交法 点杂交 一般用于多拷贝基因的探测或筛选。如Y基因探针胎儿性别诊断 Southern印迹杂交 最常用核酸分子杂交法： （1）限制酶图谱法：用于基因缺失或突变涉及限制位点改变的基因诊断。如β珠蛋白生成障碍性贫血，纤维囊性变等可用限制酶图谱法。 （2）寡核苷酸直接探测法：用于探测点突变或框架位移。 （3）限制内切酶片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）分析法：用于基因突变位点不清，分子病理学改变复杂的遗传病的基因探测。 2．聚合酶链反应 PCR具有快速、简便、灵敏度和特异性高的特点 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考，实际情况实际分析 * * 临床检验学基础 第 讲 授课教师：熊立凡 羊水检验 羊水检验概念 羊水（amniotic fluid） 妊娠时羊膜腔中液体 来源 妊娠早期：母体血浆经胎膜透析 胎儿脐带、胎盘表面羊膜及 未角化胎儿皮肤产生透析液 妊娠中晚期：胎尿（主要来源） 动态平衡 胎儿与母体之间 l?? 适应证高危妊娠有流产、早产、死胎史者疑胎儿遗传性疾病者亲代有代谢性缺陷病者曾分娩过染色体异常婴儿者高龄孕妇确定性连锁遗传病携带者胎儿性别者疑母儿血型不合者妊娠早期受大剂量电离辐射者曾患严重病毒感染性疾病者检查宫内胎儿有无感染者 l??标本采集和理学检验标本采集羊水标本由妇产科医师采集