梭罗草AFLP体系优化及指纹图谱构建-江苏农业科学.PDFVIP

江苏农业科学　２０１７年第４５卷第１６期 — ３７— 王晓醒，李淑娟，谢永丽，等．梭罗草ＡＦＬＰ体系优化及指纹图谱构建［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（１６）：３７－４１． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．１６．００８ 梭罗草ＡＦＬＰ体系优化及指纹图谱构建 王晓醒，李淑娟，谢永丽，李长慧 （青海大学农牧学院，青海西宁８１０００３） 　　摘要：利用梭罗草（Ｋｅｎｇｙｉｌｉａｔｈｏｒｏｌｄｉａｎａ）基因组 ＤＮＡ优化并建立的梭罗草扩增片段长度多态性（ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，简称ＡＦＬＰ）反应体系。预扩增反应体系２５ Ｌ：连接产物１ Ｌ，１０×ＰＣＲＢｕｆｆｅｒ２．５ Ｌ， μ μ μ ２＋ ｄＮＴＰ０．３７５ Ｌ，Ｍｇ １ Ｌ，ＴａｑＤＮＡ聚合酶０．５ Ｌ，ＥｃｏＲ 预扩引物 １ Ｌ，Ｍｓｅ 预扩引物 １．２ Ｌ，ｄｄＨＯ加至 μ μ μ Ⅰ μ Ⅰ μ ２ ２＋ ２５ Ｌ；选扩增反应体系２５ Ｌ：预扩产物（稀释２０倍）２．０ Ｌ，１０×ＰＣＲＢｕｆｆｅｒ２．５ Ｌ，ｄＮＴＰ０．６０ Ｌ，Ｍｇ ２ Ｌ， μ μ μ μ μ μ ＴａｑＤＮＡ聚合酶０．１ Ｌ，ＥｃｏＲ 选扩引物１．５ Ｌ，ＭｓｅＩ选扩引物２．５ Ｌ，ｄｄＨＯ加至２５ Ｌ。利用优化后的ＡＦＬＰ体 μ Ⅰ μ μ ２ μ 系，从梭罗草、大颖草（Ｋ．ｇｒａｎｄｉｇｌｕｍｉｓ）、疏花以礼草（Ｋ．ｌａｘｉｆｌｏｒａ）共１０份供试材料中筛选出２１６对选择性扩增引物， 从中筛选出３８对具有多态性的引物并从中选出６对条带清晰、鉴别效率高的引物，其中Ｅ１６Ｃ４、Ｅ４Ｃ１０的扩增条带中 均有梭罗草的特征条带，为梭罗草的种质鉴定及利用提供科学依据。 　　关键词：梭罗草；指纹图谱；ＡＦＬＰ体系；以礼草属；预扩增；选扩增；引物；种质鉴定 　　中图分类号：Ｑ７５５　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）１６－００３７－０５ 　　梭罗草（Ｋｅｎｇｙｉｌｉａｔｈｏｒｏｌｄｉａｎａ）属禾本科（Ｐｏａｃｅａｅ）以礼 性（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，简称 ＲＦＬＰ）和随 草属（Ｋｅｎｇｙｉｌｉａ），是亚洲中部高寒草原特有种，抗逆性强，具 机扩增多态性ＤＮＡ标记（ｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ， 下伸或横走根茎，固土能力强、抗旱、耐寒，返青早、分蘖能力 简称 ＲＡＰＤ）技术的优点，具有快速高效、稳定可靠等优 强，适应寒冷干旱的高寒草原和高寒荒漠生境，对三江源区的 势［７－８］，被广泛应用于遗传多样性分析、种质鉴定、遗传图谱 ［１－４］ ［９－１４］ 环境保护和小麦的品种改良有重要意义 。目前，对梭罗 构建等研究 。焦浈等以３种禾本科作物为材料，建立并