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中药质量标准制定的新方法中药的指纹图谱控制技术;中药的指纹图谱控制技术;一、概述（一）. 问题;（二）. 中药指纹图谱提出的背景;（二）. 中药指纹图谱提出的背景;（三） 中药指纹图谱的定义;(一）.中药指纹图谱按应用对象分类: 1. 中药材(原料药材)指纹图谱。 2. 中药原料药(包括饮片、配伍颗粒)指 纹图谱。 3. 中药制剂指纹图谱。; (二）中药指纹图谱按测定手段分类 1. 中药化学（成分）指纹图谱 2. 中药生物指纹图谱。 ; (二）中药指纹图谱按测定手段分类 1）中药化学（成分）指纹图谱定义 中药化学（成分）指纹图谱系指采用光谱、色谱和其他分析方法建立的用以表征中药化学成分的特征的指纹图谱。; 光谱最常用的是红外光谱（ IR ）。 色谱最常用的是薄层色谱（TLC）、气相色谱( GC )、高效液相色谱( HPLC )和毛细???电泳( CE )。 其他方法包括波谱和联用技术。 中药化学指纹图谱首推色谱方法和联用技术。 ;3）几种色谱指纹图谱方法的优缺点; HPLC 适用于非挥发性成分，中药中大部分化学成分均可用HPLC法得出良好的指纹图谱。 CE 适用于大部分化学成分，特别是生物大分子——肽和蛋白的分离，但其重现性有待提高。 ; 联用技术是最有效的建立指纹图谱的方法，如GC/MS，HPLC/MS，HPLC/MS/MS等可大量提供各种信息，符合解决中药复杂体系的要求，但仪器价格昂贵。不易推广使用。 总之，目前使用最多的中药化学指纹图谱是用HPLC方法。;(二）中药指纹图谱按测定手段分类 2. 中药生物指纹图谱 中药生物指纹图谱包括中药材DNA指纹图谱和研究中的中药基因组学指纹图谱、中药蛋白组学指纹图谱。 ; (二）中药指纹图谱按测定手段分类 2. 中药生物指纹图谱 中药基因组学图谱和中药蛋白组学指纹图谱系指用中药制剂作用于某特定细胞或动物后，引起的基因和蛋白的复杂的变化情况，这两种指纹图谱可称为生物活性指纹图谱。 ;三.高效液相色谱法制定中药特征指纹图谱的方法与技术要求;（一）用HPLC法建立特征指纹图谱的方法学考察;2　特征指纹图谱确定 1)确定特征指纹图谱必须具有充分的代表性和特异性，至少对10个产地以上不同等级的样品进行分析，或对同一产地不同规格的10批以上的样品进行考察。;2　特征指纹图谱确定 2) 对10批以上的样品进行考察，从中归纳出各批合格样品所共有的、峰面积相对稳定的色谱峰作为指纹峰。所选取色谱峰的组合必须具备特异性，对于原药材多来源的品种，必须考察种间的特异性。;3　特征指纹图谱的精密度考察 将同一份样品，连续进样5次，所得特征指纹图谱的各色谱峰的峰面积的RSD% 不得大于 5%，各色谱峰的相对保留时间应在平均保留时间± 1 min内。;5　特征指纹图谱的稳定性考察 取同一份样品,分别在0，1，2，4，8，12，24，36，48小时测定，以特征指纹图谱峰面积和相对保留间为指标，考察样品的稳定性。;6 特征指纹图谱各色谱峰面积比值范围的确定 根据10个以上产地不同的合格样品(或同一产地不同等级的样品)的分析结果，制定特征色谱峰的峰面积比值范围。;7. 原料药与注射剂指纹图谱之间相关性的研究 为了确保制备工艺的科学性和稳定性，应根原料药和注射剂的指纹图谱，研究二者之间的相关性。可采用加入某种原料药的供试品或制备某一原料药的阴性样品的方法，研究二者之间的相关性。;8　确证特征色谱峰的化合物结构 采用色谱方法分离特征性成分，采用UV、IR、NMR、MS等光谱、波谱方法鉴定化合物的结构，提高指纹图谱的可信度。;9　对药材基源的要求 对于多来源的中药材品种，由于不同品种的药材，其所含的成分和杂质有一定的区别，在目前中药成分尚不十分明确的状况下，建议中药注射剂所用的药材固定一个品种，确保中药注射剂的稳定性安全性。-------GAP;四、 研究实例;决明子HPLC指纹图谱的研究;1. 仪器条件;2. 供试品溶液的制备;3　方法学考察;3.2 稳定性试验 精密吸取决明子供试品溶液，分别于制备后0、3、6、9、12、15、24 h，进样，测得各共有峰相对保留时间的RSD值2%，相对峰面积的RSD值3%，表 明供试品溶液在24 h 稳定。;3.3　重复性试验 取同一批决明子药材5份，2. 2项下方法制备供试品溶液，分别进样，测得各共有峰相对保留间的RSD值2%，相对峰面积的RSD值3%。表明方法重现性良好