抗体制药（二）.pptVIP

第三章 抗体制药 第三章 抗体制药（二） 3学时 三、多功能抗体及其制备 近年来，在scFv（单链抗体）的基础上，可以把两个或两个以上的scFv重组在一起，由此可制备成多价小分子抗体即微型抗体（简称多价微抗）。 包括双链抗体（diabody），三链抗体（triabody），微型抗体（minibody）及四链抗体（tetrabody）。 多功能抗体及其制备 双链抗体制备方法：化学交联法、粘性蛋白结构域融合法和接头长度控制法。 微型抗体：通过基因工程手段采用不同的接头把单链抗体（VL-VH)的VH结构域与IG的CH3结构域融合，形成VL-VH-CH3的结构。此种抗体合成后通过CH3结构域形成稳定的二聚体形式，发挥其双价微抗的作用。 三链抗体：在制备单链抗体时，当接头的长度为2个或2个以下氨基酸残基时，或者直接把VH结构域N末端与VL结构域C末端相连，通过非共价键而形成三聚体，称三链抗体。 抗体融合蛋白 抗体的一部分被非抗体序列替代，所形成的融合蛋白具有新的特性，称之为抗体融合蛋白。 根据构建方式的不同，抗体融合蛋白主要分为两种形式： 构建抗体融合蛋白的原则 将第一个蛋白的终止密码子删除，再接上带有终止密码子的第二个蛋白基因，即可实现两个基因的共表达。 抗体酶，酶-抗体型融合蛋白，在药物治疗中有广阔的前景，它可在靶向位置上将前体药物转化成有效的药物，从而避免了对正常组织的损害。 四、基因工程抗体和抗体工程 抗体研究的三大阶段： 1890年白喉抗毒素－－多克隆抗体； 　 1975年杂交瘤技术－－单克隆抗体； 　 1994年开始－－基因工程抗体 基因工程抗体：不用人工免疫动物和细胞融合技术，完全用基因工程技术制备人源性抗体，而且还能利用基因转移和表达技术，通过细菌发酵或转基因动物、植物大规模生产抗体。 噬菌体抗体库技术的基本方法 获取目的基因 抗体库技术的载体 淘筛 表达与鉴定 获取目的基因和载体 获取目的基因：提取mRNA 经反转录PCR获取抗体某一特定基因区段，抗体基因的组合形式多为单链抗体。 抗体库技术的载体：噬菌体载体具有噬菌体和质粒的共同特点。 淘筛、表达与鉴定 淘筛：抗原固相化后，对噬菌粒群的吸附、洗涤和洗脱后再感染扩增，与辅助噬菌体超感染获得大容量次级文库，反复使目的克隆大量扩增。 表达与鉴定：目的克隆经过鉴定后，再导入感受态菌，进行可溶性表达。 噬菌体抗体库技术 噬菌体抗体库的分类 噬菌体展示技术 噬菌体抗体库技术的特点 模拟天然全套抗体库 避开了人工免疫和杂交瘤技术 可获得高亲和力的人源化抗体。 噬菌体展示技术最关键的优势 噬菌体抗体库技术的优势 单克隆抗体杂交瘤技术和噬菌体抗体展示技术比较 基因工程抗体的表达 原核生物：大肠杆菌，分 融合表达和分泌表达； 真核生物：都是分泌表达，有酵母、昆虫细胞、中国仓鼠卵细胞和真菌。 转基因植物： 烟草 转基因动物：单基因水平。 抗体在体外人源化存在的问题 操作过程复杂 成本高 抗体的亲和力降低 抗体不是人体免疫系统自然产生 异源抗体与免疫系统的配合 最理想的单克隆抗体：100％人源化，由人体免疫系统自然产生。 全人抗体的理论基础： ▲癌症、病毒、细菌对机体而言均为异己物； ▲人体不断受异己物攻击，但免疫系统通常有清除能力； ▲免疫系统通过体液免疫和细胞免疫对异己物做出反应； ▲体液免疫就是针对异己物天然地产生抗体。 全人抗体面临的关键问题：持续分泌抗体的人B细胞、抗体分泌细胞的保持。 五、抗体诊断试剂 抗原和抗体的特异性结合在体内和体外都可呈现某种反应。 在体内可表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和毒素等作用，可作为药物用于治疗； 在体外可发生凝集或沉淀等反应，可用已知抗体来鉴定抗原，作病原学的诊断和血型测定。 抗体诊断药物分类 三类： 血清学鉴定用的抗体类试剂 免疫标记技术用的抗体类试剂 导向诊断药物 血清学鉴定用的抗体类试剂 血清学鉴定 是指用已知抗体来鉴定未知的抗原型，主要用于疾病的病原菌的诊断和血型鉴定。常用凝集反应。 鉴定病原菌的抗体试剂 用单克隆抗体可以检测出多种病毒中非常细微的株间差异； 鉴定细菌的种型和亚种，这是传统血清法或动物免疫幅所做不到的，而且诊断异常准确。 还可以检查出某些还尚无临床表现的极小肿瘤病灶，检测心肌梗死的位置和面积，为有效治疗提供方便。 常用品种和用途 诊断血清 分群血清 分型血清 因子血清 沙门氏菌属诊断血清 志贺氏菌属诊断血清 病原性大肠埃希氏菌诊断血清 诊断血清的制备步骤 制备细菌抗原：细菌接种、培养、收集菌苔、制成菌液； 免疫动物和制备抗体血清：动物有家兔、马、羊、豚鼠；免疫途径：静脉、腹腔、