激光显微切割从组织切片中提取单个细胞进行PCR的方法探讨-病理学专业论文.docxVIP

激光显微切割从组织切片中提取单个细胞进行PCR的方法探讨 激光显微切割从组织切片中提取单个细胞进行PCR的方法探讨 第2页共82页 英文缩写索引 LCM laser capture microdissection 激光捕获照微切割 PCR 聚合酶链反应 DNA deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核瞢酸 Bp base pair 碱基对 tl氍 lymph node reactive hyperplasia 淋巴缩反寂性增璧 }辍 Hodgldn’s lymphoma 霍奇鑫游罄癌 强啜S Hodgkin／Reed-Stemberg cells 里一藏鳃跪 黼HL nodular sclerosis Hodgldn’s lymphoma 结节磺他型搽奄金漤巴癌 朗 immunoglobulin heavy chain 免疫球蛋白霪链 蛾 immunoglobulin light chain 免疫球蛋白轻链 WH0 World Health Organization 世界卫生组织 Nm nafional institute of health 美国豳立卫嫩研究院 0啪 callcer genorne anatomy project 肿瘤藻因解削计划 融 e{,hXlene 乙烯苏酸乙烯酯 vinyl acetate P辨 primer-extension preamplifieation 弓|穆延律颈扩增 墼垄墨竺捌竺垒篓塑苎置坚兰尘塑照熊堡呈竖塑窭缝竖茎 墼垄墨竺捌竺垒篓塑苎置坚兰尘塑照熊堡呈竖塑窭缝竖茎 墨!基燕．璺!里 激毙燕徽舞裁从缀辍餐．跨牵提取单个帮臆进行N鬏瓣君淡探讨 磷懿生：张玉肇 导蜂：支4庚繁耀飞教授 攘 要 【豳的】 探讨虑用激光捕获显微切割从褥蜡切片和冰凉切片中进行单个绷胞分 离露蘩会激链反应◇e鬏》装拳程方法攀上爨露嚣熬，轰遴一莎褥该蔹米惩予簇惫金 漤巴瘿熬潦入璎突蒸慰簇礁。 【方法】 采用激光捕获显微协剿瓣46铡淋巴缡反应蠼增黧嚣蠖缝织秽2铡淮 巴缡交液瞧增生球舔绦缀，避褥单个鳎照努甍耱聚食酶镰反巍《薹，镄磅。采麓激鑫酶 K漓亿褥瑕DNA，选鞭爵一珠鬣自熬阑弓|物进彳予浆台酶镀反成(PCR)及EB染色技 术，采用凝胶成像露像给据系绫避褥分摄。繁毙瓣扶100个淋毽凝脆鬟取熬DNA 逮费扩穗，穗现鬻毪缩莱嚣秀遴次递减，囊惹对零鬃藤鬟致敬DNA邋器扩壤，菸 对缝聚遴稽练合分析。统计学方法：备缀闻藏异采蹋X2检验，P0．05表泳麓异 有曼藩热。 【绪暴l 曩蟮缀缎繇次每管箍畿豹湃巴缨臌数100、80．60、50令，护垮效率 分别为58．3％(21／36)、32．5％03／40)、7。7％(4／52)、1,7％(4／240)；姆次每瞥摄淑的淋 墨缨貔数瘵5枣增翱翔的枣，均泰髓扩增密特舆毪DNA片羧。港冻缀织每次每 管提墩黝潍恐缎瓞数100、80、国、钧、∞、蠲、ls、10、8、6令，扩壤效率分裂 为91．7％(22／24)、80．0雠24／30)、75．0％(24／32)、55．6％(20／36)、42．9％02a8)、 30．6％(11／36)．1秘烬辨龄、9．4％(6／64)、2．2％(8／360)、1．9％(9／480)；露簿嚣1-5 令细胞菸弦240次扩臻，均寒熬扩壤爨特吴毪DNA篾段。2壤游艺缍爱斑搜壤生 冰冻级织，镪淋巴滤泡中，共捕获外密层淋暇细胞和生发中心绷胞各48管，罐管 ∞令潍聪缨耀，乡}套艨漤巴藜熬扩壤效率为47．9％(23／48)，嚣拳发孛心缀爨扩壤 效率议麓14．6％(7／48)t 【结‘论1 证实了虚用激光捕获盛微切割从组织切肚上进行攀个细胞分离嬲PCR 在方浚学童熬莓稽程，浚麓簸篷缀秘跨孛逶野攀缁艨分饔积PCR箕毫较磐熬扩增 效率释特辩镌。缝缓蠲菏七提取攀个绷貔静PCR扩灞效率，泳撩组织硝驻倪予石 3 激光显微切割从组织切片中提取单个细胞进行PCR的方法探讨 激光显微切割从组织切片中提取单个细胞进行PCR的方法探讨 第4页共82页 蟮镪埋组织；细胞大小和切片厚度是影响扩增效率的重鬻因素；单细胞PCR扩增 效攀与扔贻PCR模攫黪澍冬方法密按掇关。 【关键词】激光攘获照微切割；单细胞分离；聚食酶链反应；淋巴结反应性增生 4 鳖查墨苎塑麴些怒塑生±坚壁尘塑堕垄箜!熙竺查建堡苎 鳖查墨苎塑麴些怒塑生±坚壁尘塑堕垄箜!熙竺查建堡苎 ，． 蔓三至查j!!互 To explore PCR for single cell isolation by laser capture microdissection in the tissue section Postgraduate：ZhangYuhua Tutor．Pro．Liu Qingrong Deng Fei Abstract