乙型肝炎血清学和分子生物学检测技术课件.pptVIP

操作步骤 1、 平衡： 将试剂盒取出， 平衡至室温30min，微孔板开封后， 余者及时以自封袋封存。标本也需室温平衡30min 。 2、 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（ 如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1： 1 9 稀释后使用。 3、 编号： 将微孔条固定于支架， 按序编号，设阴阳性对照各2孔和空白对照1孔（双波长可不设空白孔）。 4、 稀释：将待测标本用生理盐水做1：1000稀释（质控品及阴阳性对照不稀释） 5、 加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴阳性对照100ul， 6、 温育：封板、37℃温育30分钟。 7、 洗涤：5遍，最后1次尽量扣干 8、 加酶：每孔加酶标试剂100ul，空白孔除外 9、 温育：同步骤6 10、洗涤：同步骤7 11、显色：每孔加入显色剂A、B液各50ul，混匀， 37℃避光显色15min 12、测定：每孔加入终止液50ul，混匀，10min内测定结果。设酶标仪波长450nm（建议用双波长450/600-650nm检测），用空白孔调零后测定各孔A值。 成为入党积极分子已经快要一年了，在这期间，我始终以党员的标准要求自己。在组织的关怀和党员的帮助下，我在思想上和实践上都取得了明显的进步 乙型肝炎病毒血清学和分子生物学检测技术 临清市疾病预防控制中心 乙肝病毒研究历史 1963年Blumberg 在澳洲土著人血清中发现，简称澳抗。 1970年Dane发现HBV病毒颗粒，称Dane颗粒 1983年将HBV归为嗜肝病毒科 * 我国HBV感染概况 一般人群HBsAg携带率高达7.18%；现有慢性HBV感染者约9 300万人，占全世界的1/4； 其中慢性乙型病毒性肝炎患者超过 2 000万例，占全世界慢性乙肝患者的1/3； 15岁以下儿童HBsAg携带率下降显著，1-4岁组仅为0.96%。 * 病毒形态与基因结构 嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)正肝DNA病毒属 电镜：3种形态 结构和基因 HBV的基因组长约3.2kb，非闭合的双股环状DNA。 短链：为正链，长度是长链的50％～100％ 长链：为负链，含HBV全部遗传信息 有4个开放读码框架： S区：编码HBsAg；前S1抗原、前S2抗原 C区：编码HBcAg和HBeAg； X区：编码HBxAg，并与肝细胞癌变有关 P区：编码DNA多聚酶。 其中S区和前S区的基因容易发生变异。 HBV基因组和基因表达产物 3200 bp 4 open reading frames 7 proteins 大蛋白(preS1-preS2-S) 中蛋白(preS2-S) 小蛋白(HBsAg) 核衣壳(HBcAg) HBeAg 聚合酶 X蛋白 HBV基因型的世界分布 基因型 分布的国家和地区 A B C D E F G H 西欧、北欧、北美、中非 东南亚、中国、日本 东亚、中国、日本、波利尼西亚等 南欧、地中海、印度 西非 美国土著人、波利尼西亚、中南美 美国、法国 尼加拉瓜、墨西哥、美国 血清型 adw2 ayw1 adw2 ayw1 adw2 adrq+ adrq- ayr ayw2 ayw3 ayw4 adw4q- adw2 ayw4 adw2 ? 机体感染HBV后产生相应的免疫反应，形成多种不同的抗原抗体系统 表面抗原抗体系统 (HBsAg，抗-HBs) e 抗原抗体系统 (HBeAg，抗-HBe) 核心抗原抗体系统 (HBcAg，抗-HBc) HBsAg 最早出现的血清学标志之一 是HBV感染的基本标志 HBsAg阳性见于 乙肝的潜伏期、急性期 慢性乙肝 病毒携带 与HBV感染有关的肝硬化和原发性肝细胞癌 抗-HBs 特异性中和抗体、保护性抗体 抗-HBs阳性可见于 乙型肝炎恢复期，在HBsAg消失后间隔一定时间抗-HBs出现隐性感染的健康人，自身产生了免疫力 注射乙肝疫苗或乙肝高效价免疫球蛋白(HBIG)后，产生的主动或被动免疫 HBeAg 与HBsAg平行出现，较HBsAg消失早 意义 体内HBV复制、传染性强的标志 急性乙型肝炎的辅助诊断 判断预后的指标：HBeAg转阴，表示HBV复制减少或终止，预后好；若HBeAg持续阳性，则预后不良，易转为慢性 抗-HBe HBeAg消失后出现无症状HBV携带者及