第8章 层析分离.ppt

第8章 层析分离 知识点：色层分离法的分类及其概念，柱层析技术，吸附层析技术，离交层析技术，生物亲和层析技术，分配层析技术，凝胶过滤技术，电泳技术，薄板层析技术。 重点：上述各技术的原理、操作方式、操作过程、所用装置和材料的选择、适用范围，能够灵活熟练地运用这些技术。 难点：常用层析法的分类及其合理选用。 目　录　 1 层析法概述 2 柱层析 3 纸层析 4 薄层层析 5 吸附层析 6 分配层析 7 凝胶过滤 8 电泳法 9 毛细管电泳 10高效液相色谱 1 层析法概述 1.1　引言 1.2　层析的发展史 1.3　层析的基本原理及基本概念 1.4　层析的分类 1.5　层析剂 1.1 引言 层析原理 色谱（层析）法应用范围 色谱技术的提出 色谱分离图示 1.2 层析的发展史 1.3 层析基本概念 层析 展开（development） 洗脱液(eluate) 色谱(Chromatograph)。 分配系数 洗脱体积： 外体积： 内体积 ： 正相层析： 反相层析： 1.4 层析分类 吸附色谱与其它色谱法的异同点 1.4 层析的分类 ⑴根据溶质分子与固定相相互作用的机理不同的分类 ⑵ 根据实验技术的分类 ⑶ 根据固定相的形状不同的分类： ⑷ 根据流动相的物态不同的分类 ⑸ 操作方式不同的分类 1.5 层析剂种类 2 柱层析法 柱色谱法对色谱介质材料的要求 常用柱色谱介质的分类 柱层析系统的组成 柱色谱洗脱方法 常用柱色谱介质的分类 无机物色谱介质包括：氧化铝、硅胶、活性炭、膨润土、磷酸钙(凝胶型和晶型)、氧化钛和氢氧化锌凝胶等。 聚合物色谱介质有：琼脂糖、葡聚糖、纤维素和聚丙烯酰胺等。 柱色谱洗脱方法 洗脱一般有三种方法： ①恒定洗脱法： ②逐次洗脱法： ③梯度洗脱法： 梯度洗脱法是目前最常用的洗脱法。 浓度梯度制造器 柱色谱系统的组成 色谱介质有各种各样，但柱式色谱系统的组成基本相似，一般由蠕动泵、色谱柱、检测器、记录仪以及部分收集器等几个部分构成(图2)。 柱层析系统的组成 柱式层析系统的组成基本相似。由以下几个部分构成： A 蠕动泵 B 层析柱 C 装柱 D 加试样 E 洗脱 F 检测器 G 部分收集器 柱层析装置图 3 纸层析法 3.1 基本原理 3.2 操作方法 3.3 操作步骤 小实验 当滤纸接触到溶剂时，溶液将上升。 滤纸上的小圆点是4种不同的氨基酸的混合物。 看看接下来会发生什么事情… 可以看出1号氨基酸上升的最高，在滤纸上跑得最快。 而4号氨基酸与滤纸的结合最紧，因此跑的速度比其他的氨基酸慢。 这就是纸层析法。 对照上图，可知道1-4号的各代表什么氨基酸。 纸层析法是分离鉴定蛋白质的氨基酸组成的重要工具。 滤纸的选用 4 薄层层析法 4.1 薄层层析原理 4.2 吸附剂及展开剂 4.3 特殊薄层 4.4 薄层层析操作要点 4.5 定性分析 4.6 定量分析 4.7 薄层层析应用 4.4 薄层层析操作要点 铺板 点样 点样量 展开 显色 注：本部分以操作要点注意事项为主，具体过程参见咖啡因的分离分析（动画演示） Do you understand? 薄层层析应用示例 咖啡因的分离分析 （动画演示） 5 吸附层析法 5.1 吸附层析定义及原理 5.2 吸附色层与其他色层分离法的异同点 5.3 吸附层析的分类 5.4 无机吸附色层分离法 5.5 疏水作用层析（HIC） 5.6 金属螯合层析 5.7 共价作用层析法 5.8 离子交换层析法 5.9 卡那霉素A、B组分分离纯化典型实例 吸附色层与其他色层分离法的异同点 吸附层析的分类 无机材料的吸附色层分离法 离子交换色层分离法 疏水作用色层分离法 共价作用色层分离法 金属螯合作用色层分离法等 作业 名词解释：梯度洗脱法、共价作用层析、免疫亲和层析、层析剂的排阻效应、分配层析、离子交换层析、凝胶过滤： 2.填 空： 1)??? 凝胶过滤主要应用于＿＿＿＿＿＿＿，＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿。凝胶过滤时＿＿＿＿＿＿先自柱中流出，凝胶电泳中＿＿＿＿＿运动速度更快，凝胶电泳是基于＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿双重机理，常用的凝胶剂有＿＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿＿。 2)??? 共价作用层析主要依靠＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的原理，吸附层析是基于＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的机理，蛋白质和离子交换剂的结合是通过＿＿＿＿＿＿＿＿＿