斑节对虾溶菌酶基因的原核表达与产物活性检测-水产学报.PDF

第 29 卷第 1 期 水 　产 　学 　报 Vol . 29 , N o . 1 　 2005 年 2 月 　　　　　　　　　　　　 　 　　　　　　　　　 Feb . , 2005 　 J OURNAL OF FISHERIES OF CHINA 文章编号 :1000 - 06 15 (2005) 0 1 - 0020 - 05 斑节对虾溶菌酶基因的原核表达与产物活性检测 1 ,2 1 1 1 1 1 郑清梅 , 　叶　星 , 　白俊杰 , 　吴锐全 , 　劳海华 , 　罗建仁 ( 1. 中国水产科学研究院珠江水产研究所 ,广东 广州 　510380 ; 2 . 湛江海洋大学水产学院, 广东 湛江 　524025) 摘要 :采用 PCR 方法对所克隆的斑节对虾溶菌酶基因的 cDNA 进行改造 , 并克隆至含温控启动子 P P 的大肠 R L 杆菌表达质粒 pBV220 , 构建斑节对虾溶菌酶表达载体 pBV220lyz 。该质粒转化大肠杆菌后经 42 ℃诱导表达 。 SDSPA GE 电泳表明,表达产物中有 16kD 左右的特异性条带 , 与预期斑节对虾溶菌酶分子量相符 。薄层扫描 显示 ,重组斑节对虾溶菌酶约占全菌总蛋白的32 % , 纯化后的重组斑节对虾溶菌酶占全菌可溶性蛋白的 90 % 左右 。比浊法检测复性后产物的生物活性 , 结果表明重组斑节对虾溶菌酶的最适 p H 为 6 . 0 , 最适温度为 40 ℃。测定了重组斑节对虾溶菌酶对溶壁微球菌和几种鱼病原菌菌株的溶菌活力 , 结果表明, 重组斑节对虾 溶菌酶对溶壁微球菌 、溶藻弧菌和鳗弧菌有较强的溶菌活力 ,对爱德华氏菌有一定的溶菌活力 ,对嗜水气单胞 菌 、副溶血弧菌和大肠杆菌 DH5α溶菌活力较弱 。 关键词 :斑节对虾; 溶菌酶基因; 原核表达; 溶菌活性 中图分类号 :S917 　　　　　　　文献标识码 :A Expression of Penaeus monodon lysozyme gene in prokaryocyte system and evaluation of its lytic activity ZHEN G Qingmei1 ,2 , YE Xing1 , BAI J unj ie1 , WU Ruiquan1 , LAO Haihua1 , LUO J ianren1 ( 1. Pearl River Fisheries Research Institute , Chinese Academy of Fishery Sciences , Guangzhou 　510380 , China ; 2 . Fisheries College of Zhanj iang Ocean University , Zhanj iang 　524025 , China) Abstract :