细菌革兰氏染色.doc

细菌革兰氏染色 实验目的： 1、了解细菌革兰氏染色的原理 2、学习和掌握革兰氏染色的方法 实验原理： 革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚交联度高而致密，乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物在细胞壁内不被脱色，使细胞呈现紫色。 革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，交联度低，类脂含量高，乙醇处理后，类脂被乙醇溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞而细胞被脱色，蕃红复染后呈现红色。? 革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料初染液；媒染剂；脱色剂和复染液。碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine）是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95%的酒精（ethanol）。 实验步骤： 1、涂片：取活跃生长期菌种按常规方法涂片（不宜过厚） 2、固定：将干燥的涂片在微火上过3-4次固定； 3、初染：在涂片处滴加草酸铵结晶紫1-2滴，使其布满涂菌部分，染色1分钟，水洗至流出水无色； 4、媒染：滴加革兰氏碘液冲去残水，用碘液覆盖1分钟，水洗至流出水无色； 5、脱色：滴加95%乙醇轻轻摇动载片洗至乙醇液无色，用水冲净乙醇并用滤纸吸干； 6、复染：蕃红复染1分钟，水洗； 7、镜检：吸干后镜检 实验结果： 球状，紫色，为革兰氏阳性菌（图1）? ? 2、杆状，红色，为革兰氏阴性菌（图2） 图1 图2 思考与讨论 1、固定时如果温度过高将导致菌种死亡，细胞结构被破坏，影响染色效果。 2、假阳性：可能是因为乙醇脱色不完全使结晶紫没有完全洗去而呈现出阳性菌的现象假阴性：可能因为乙醇脱色时间过长或细菌已经死亡，致使细胞通透性增加，结晶紫泄出而呈现阴性菌的现象。 3、为方便镜检和观察细菌的形态，涂片不能涂得太厚。