牦牛IL-4基因的克隆及其遗传演化关系分析.PDF

, 2008, 29( 8) : 24-28 Progress in Veterinary Medicine * IL-4 1, 2 2 2 2 1,2 2 1, 2* 何延华 , 房永祥 , 陈国华, 段风云 , 王生富 , 李小庆 , 景志忠 ( 1. , 7 0070; 2. , 7 0046) : 克隆牦牛白细胞介素-4( IL-4) 基因, 对其进行遗传演化分析从刀豆素( ConA) 和脂多糖 ( LPS) 联合刺激培养的牦牛外周血淋巴细胞提取总RNA, 利用RT-PCR 方法扩增牦牛IL-4 全长cDNA, 将 其克隆到pMD 18-T 载体上, 测序后进行序列分析成功克隆到牦牛IL-4 基因全序列, 序列分析表明, 克隆 的牦牛IL-4基因序列与GenBank 所登录的牛IL-4 核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性分别达99. 8% 和100% , 与人猕猴猪山羊马等物种的核苷酸及其推导氨基酸序列的同源性分别在44. 4%~ 96. % 和 27. 4%~ 91. 1% 之间在国内首次成功地从牦牛外周血淋巴细胞中克隆到IL-4 的基因, 其ORF 为408 bp, 推导编码 1 5 个氨基酸 : 白介素4; 克隆; 序列分析; 牦牛 : S858. 2 ; S814. 8 : A : 1007-50 8( 2008) 08-0024-05 4( interleukin-4, IL-4) 20 pM D18-T 80 , ( ) B B 1640 [ 1] T IL-4 T Hyclone T , 1. 2 方法 M HC Ò 1. 2. 1 PCR N CBI [ 2] , IL-4, IL-4 , IL-4 : 5c-CA C AT T GTC AGT GCA AA T AGA , , IL-4 LPS G- c; : 5c-AGC T TC AAC ACT TGG [ ] AGT A TT T C- c, [ ] [ 4] [ 5] [ 6] [ 7] IL-4 , IL-4 1. 2. 2 , , PBM C , , PBS , RPM I1640 , , , PBM C RP- 7 IL-4 , M I1640, 1 @ 10 / mL , 5% CO2 , 1 7 e 1 h , 10 Lg/ mL 1. 1 材料 ConA, 20 h, Ex Taq M-MLV , T E( pH 8. 0) EcoR ÑdNTP M ix ( ) Trizol Invertoge 1. 2. RNA