课件：非小细胞肺癌患者基因检测.ppt

EGFR基因突变检测的一般原则 为使患者尽可能地从最有效的治疗中受益，所有NSCLC，只要条件许可，都应进行EGFR突变的检测，特别是肺腺癌。 EGFR基因突变检测标本 肿瘤部位的新鲜组织、活检组织、手术切除标本和细胞学标本均可用于EGFR突变的检测。 理想的标本，需保证200～400个肿瘤细胞（文献报道大于100个即可） 检测标本 冰冻组织 外科手术标本：最好标本，可获得高质量肿瘤DNA，取得可靠检测结果---广泛使用 穿刺活检、支气管镜标本：量少，但肿瘤DNA质量仍好，获得较可靠检测结果---使用受限 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 检测标本 固定包埋组织 外科手术标本：可得足量肿瘤DNA，虽然DNA片段化，但仍获得可靠检测结果---使用受限 支气管镜、穿刺活检标本：可得肿瘤DNA量少且片段化，获得较可靠检测结果，有时DNA量少。---极度受限 检测标本 淋巴结标本也可——淋巴结标本中EGFR突变能否反映原发灶中EGFR状态？ 外周血、癌性胸水、经支气管细针穿刺标本有研究也有阳性结果 外周血标本：血浆中游离DNA（cfDNA）浓度变化很大（10~1200ng/ml）, cfDNA片段很短（180bp），可能多由凋亡产生，肿瘤释放的cfDNA在总cfDNA中的含量不稳定（3%~93%） 胸水可以做——前景很好 标本的处理 新鲜组织（手术、穿刺、支纤镜下活检样本等） 含有肿瘤组织50%以上；重量≥10ｍg（约米粒大小，尽量提供所有穿刺样本），经PBS或生理盐水冲洗干净。 取癌组织的中心位置组织块，切至厚度在0.5cm以下，浸没于75～100%的乙醇中60分钟以上；可在4℃冰箱暂时保存。 送检前可倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输，确保样本在3天内到达。 标本的处理 癌性胸水脱落细胞 尽量收集更多胸水，离心后去掉上清，沉淀物必须1毫升。如需长途运输，加入乙醇浸泡60分钟以上。为符合托运要求，可付运前可离心后倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输，确保3天内到达。 EGFR检测方法 目前公认有两种：测序法和ARMS法（等位基因特异PCR+荧光探针） EGFR检测方法 测序法 ARMS法 敏感度 10~30%(变异) 1~0.1 %(变异) 发现突变 已知和未知 已知 石蜡包埋组织成功率 低 高 假阳性（交叉污染） 多 少 假阴性 多 少 检测流程 复杂漫长，污染多 简单快速 仪器成本 高 低 试剂成本 低 略高 EGFR检测方法 北京协和张静报道：82例NSCLC 直接测序法中24例无结果，ARMS法均有结果，且16例检测到变异 中华病理学杂志，2008,37（5） 有结果 变异率 测序法 70.7% （58/82例） 43.1%(25/58例） ARMS法 100%（82/82例） 51.2 %(42/82例） 关于胸水EGFR突变的检测 Cancer Sci. 2006;97(7):642-8. Int J Cancer. 2006;119(10):2353-8. Chang Gung Med J. 2006;29(4):373-9. Br J Cancer. 2006;95(10):1390-5. J Cancer Res Clin Oncol. 2010;136(9):1341-7. 国内外胸水标本EGFR检测的研究 作者 国家/地区 病例数 EGFR突变率（%） Kimura H 日本 24 33% Soh J 日本 61 26% Hung MS 台湾 29 41% Kimura H 日本 43 25.6% Jian G 中国 32 28.1% 用胸水检测肿瘤EGFR突变需要敏感方法 用胸水中细胞及无细胞液均可检测EGFR突变，且检出率基本相同 目前缺少胸水与肿瘤组织直接对比（配对样本检测）数据，故对其敏感度与特异性尚无结论 胸膜转移和胸水的对比研究 本研究的目的：探索胸腔积液与胸膜转移灶EGFR突变检测的一致性，从而判断当存在胸膜转移灶时，胸液EGFR基因突变状态检测的价值。 收集2011年4月-2012年12月间就诊于上海长海医院呼吸科符合入组条件患者的胸液标本及相应的胸膜转移病灶组织，共35对样本。 研究步骤 胸膜转移灶样本采集 电子胸腔镜在局麻下进行胸腔镜检查术 镜下见病灶后以活检4-6块组织，10%中性福尔马林固定，后包埋成蜡块 每例蜡块切取10-12片5μm 厚连续切片