生物技术概 论讲义汇总.ppt

（2）酶稳定性提高 酶稳定性包括热稳定性，对各种有机试剂的稳定性，对酸碱的稳定性，对蛋白水解酶的抗性及储存稳定性等。固定化酶长稳定性提高的原因可能是由于固定化后酶与载体多点连接或酶分子间的交联，防止了酶分子的伸展变形，同时也抑制了自降解反应。 （3）最适pH的变化 酶固定化后，催化底物的最适 和pH活性曲线常发生变化，其原因是微环境表面电荷的影响。 （4）最适温度的变化 在一般情况下，固定化后的酶失活速度下降，所以最适温度也随之提高。 （5）动力学常数的变化 表观米氏常数往往比游离酶的米氏常数高，而最大反应速度变小；此外，动力学常数的变化还受溶液中离子强度的影响。 4 固定化酶（细胞）的指标 为考察它的性质，可以参通过测定固定化酶的各种参数，来判断固定化立法的优劣，及其固定化酶的实用性，常见的评估指标有以下几条： （1）相对酶活力 具有相同酶蛋白量的固定化酶与游离酶活力的比值称为相对酶活力，它与载体结构，颗粒大小，底物分子质量大小及酶的结合效率有关，相对酶活力低于75%的固定化酶，一般没有实际应用价值。 （2）酶的活力回收率 固定化酶的总活力与用于固定化的酶的总活力之比称为酶的活力回收率，将酶进行固定化时，总有一部分酶没有与载体结合在一起，测定酶的活力回收率可以确定固定化的效果。 （3）固定化酶的半衰期 即固定化酶的活力下降到为初始活力一闰所经历的时间，用 表示，它是衡量固定化酶操作稳定性的关键。 四 酶反应器： 以酶为催化剂进行反应所需要的设备称之为反应器。 1 酶反应器的基本类型 ①搅拌缸型反应器 ②固定床型反应器 ③流化床型反应器 ④膜式反应器。 2 酶反应器的操作： ①谨防微生物污染 ②控制好反应器中流动方式（针对流动式反应器） ③控制好填充床内的样品流速（对固定化） 生物传感器的应用 人类基因组计划 七 ．固体发酵 某些微生物生长需水很少，可利用疏松而含有必需营养物的固体培养基进行发酵生产，称为固体发酵。如：酿酒、制酱等。还用于蘑菇的生产、奶酪和泡菜的制作以及动植物废料的堆肥等。 固体发酵一般都是开放式的，因而不是纯培养，无菌要求不高，它的一般过程为： ①将原料预加工后再经蒸煮灭菌， ②然后制成含一定水分的固体物料， ③接入预先培养好的菌种，进行发酵。 ④发酵成熟后要适时出料。 用到的设备有帘子，曲盘和曲箱等。 优点：固体发酵所用原料一般为经济易得，富含营养物质的工农业中的副、废产品，如麸皮、薯粉、大豆饼粉、高梁,玉米粉等.尿素、硫酸铵、无机酸、碱等辅料。 固体发酵所需设备简单，操作容易，并可因陋就简，因地制宜地利用一些来源丰富的工农业副产品，因此至今仍在某些产品的生产上不同程度地沿用着。 缺点：劳动强度大，不便于机械化操作，微生物品种少，生长慢，产品有限等。 酶工程 定义:酶工程是研究酶的生产和应用的一门技术学科,它包括酶制剂的制备,酶的固定化,酶的修饰与改造及酶反应器等方面内容。 一 酶的制备：酶的生产可以通过动植物组织和某些微生物提出取，但从动植物组织中提取酶成本高，得率低，所以现在一般用微生物发酵生产酶。 1 发酵：选择合适的产酶菌株，采用适当的培养基和培养方式进行发酵使微生物生长繁殖并合成大量所需的酶。 2 酶的分离纯化： 一般流程： 破碎细胞———离心分离-----溶剂抽提——过滤——浓缩——干燥。 注意事项： 酶在抽提过程易失活，所以 ①低温操作， ②用缓冲液作溶剂， ③选择适合的盐浓度避免盐现象， ④避免搅拌剧烈。 ①破碎细胞 破碎细胞有许多方法,动植物细胞常用高速组织捣碎机和组织匀浆器破碎,而微生物细胞的破碎则有机械破碎法、酶法、化学试剂法和物理破碎法等多种. 珠磨机 高压均质机 ②溶剂抽提 大多数酶蛋白都可用稀碱或稀盐溶液浸泡抽提,选用溶剂和抽提条件视酶的溶解性和稳定性而定，抽提时应注意溶剂种类、溶剂量、溶剂 等的选择 吊篮式萃取设备 萃取工艺流程图 ③离心分离 离心分离是酶分离提纯中最常用的方法，主要用于除去细胞碎片或抽提过程中生成的沉淀物。工业上常用板框压滤机来完成酶的粗分离。 过滤 不锈钢板框过滤机 碟片离心机 ④浓缩 由于发酵液或酶抽提液中酶的浓度一般都比较低，必须经过进一步纯化以便于保存、运输和应用。大多数纯化酶的操作如吸附、沉淀、凝胶过滤等均包含了酶的浓缩作用，工业上常采用真空薄膜浓缩法以保证酶在浓缩过程中基本不失活。 离子交换树脂柱设计图 ⑤干燥 酶 溶液或含水量高的酶制剂即使在低温下也极不稳定，只能作短期保存。为便于酶制剂的长时间的运输、储存，防止酶变性，往往需用对酶进行干燥，制成含水量较低的制品。常用的干燥方法有真空干燥、冷冻干燥、喷雾干燥等。 喷雾干燥设备 3 酶的纯