生物化学九 章-核酸代谢教材编辑.pptVIP

; DNA复制时，亲代DNA的双螺旋先解旋并分开，然后以每条链为模板，按照碱基配对原则，各形成一条互补链。这样，从亲代的一个DNA双螺旋分子复制成两个与亲代的碱基序列完全相同的子代DNA分子。每个子代DNA分子中，有一条链来自亲代DNA，另一条则是新形成的，这样的复制方式叫做半保留复制（semiconservative replication）。;DNA半保留复制实验证据 1958年Meselson(梅塞尔森)和Stall(斯塔尔)用同位素（15N）和氯化铯密度梯度离心，首次证明了DNA的半保留复制。;;;复制的反应;二、聚合酶I 1956年Kornberg科恩伯格提取出了DNA聚合酶I。 此酶为单肽链蛋白质，它以脱氧核苷三磷酸为活性单体物质来合成DNA链 DNA聚合酶I在合成DNA时需下列物质： （1）所有四种脱氧核苷三磷酸-dATP、-dGTP、-dCTP、-dTTP(脱氧胸苷三磷酸)及Mg2+。 （2）带有自由3-羟基末端的有一定长度的DNA链作为前体，DNA聚合酶I不能从头开始合成DNA。 （3）DNA模板 DNA合成时增链的方向是从5‘?3’的方向进行， 增链速度约为10个核苷酸/秒;;; 三、DNA聚合酶II和III 1970年从大肠杆菌中分离出了DNA聚合酶II和III 在生物体中，聚合酶III的功能是合成新的DNA链； DNA聚合酶I的功能是除去RNA引链和修补裂口。 DNA聚合酶II的功能尚不清楚。;DNA聚合酶III是大肠杆菌DNA复制过程中真正的复制酶！;;五、单链DNA结合蛋白 (single stranded DNA-binding protein,SSB) 选择性地与单链DNA结合。 作用：稳定DNA单链模板,包括防止重新形成双 链、双螺旋结构以及防止被核酸酶水解。;六、 引物酶(Primase) 实际上该酶是一种特殊的RNA聚合酶。 作用: 在DNA复制开始时,在5′–端(5′ ? 3′方向）合成一小段RNA引物。;七、DNA聚合连接酶 1967年，在几个实验室同时发现了一种DNA连接酶 作用：催化一条链的5’-磷酸末端与另一条链的3’-OH末端之间形成磷酸二酯健。 只能连接处于nick（缺口）状态的双链DNA，不能连接游离的两条单链DNA;;八、DNA的复制 真核细胞的复制是从多个起点开始的，以双向方式复制 可是任何一种DNA聚合酶只能进行5‘?3’的复制（领头链）。 如何解决以5‘?3’为模板进行复制的过程？;复制的起始;;; 复制过程的调控主要取决于复制启动的频率，而DNA延长的速度大体上是恒定的。由于真核生物在多位点上启动复制，所以尽管其DNA比原核生物DNA大得多，但复制的总速度反而比原核生物快。 ;链的延长;随后链：;; 这种前导链连续合成，随后链断续合成的方式，称为半不连续复制。 随后链中合成的多个DNA片段，称为冈崎片段。冈崎片段的长度原核细胞中约1000~2000个核苷酸，真核细胞中约100~200个核苷酸。?; 引物酶在复制原点附近合成一段RNA引物； DNA聚合酶Ⅲ (原核细胞)在引物的3末端逐个添加脱氧核苷酸。 随着复制叉的推进，亲代DNA双螺旋不断被解开，先导链也不断延伸。?;② 随后链的合成;② 随后链的合成;③ 先导链和随后链中DNA的延伸由同一个DNA聚合酶Ⅲ全 酶二聚体催化;复制的终止;;九、DNA的复修 修复步骤如下： （1）特异的内切酶与损伤部位结合，在损伤部位的5-端切断磷酸二酯键；（限制性内切酶降解陌生的DNA） （2）外切酶水解除去包括损伤部位在内的一小段DNA单链。 （3）DNA聚合酶I催化以母体为模板进行修复5‘?3’。 （4）连接酶进行连接。 ;差错率为10-9-10-10; DNA分子的完整性对细胞至关重要，这一点是其它生物分子无法比拟的。在生物的进化中，DNA复制中可因DNA聚合酶催化作用引发出偶然的错误。环境因素（如辐射、紫外光照射、化学诱变物等）也可引起DNA序列上的错误，这些错误若不能予以改正而保留下来，会直接影响机体的生理功能，以致影响到后代的正常生长和发育。但是，生物体内存在有效的修复（repair）体系，保证了DNA复制的高度精确性。 ;1. DNA损伤的原因;; 2. 修复;(2) 切除修复 该类修复是指在一系列酶的作用下，将DNA分子中受损伤的部分切除，并以完整的那一条链为模板，合成出新的被切去的部分，然后使损伤的DNA恢复正常结构的过程。切除修复系统可对多种损伤起修复作用。切除修复有核苷酸切除修复（nucleotide excision repair, NER）和碱基切除修复（base excision