实验六影响酶促反应速度的因素.docVIP

生物化学实验下载-样例.doc 实验四　影响酶促反应速度的因素 　　【目的】 　　观察温度、PH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。 　　【原理】 唾液淀粉酶催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、麦芽糖和葡萄糖等。淀粉及其水解产物遇碘会呈现不同的颜色。 在不同温度，不同PH值下，唾液淀粉酶活性不同，催化淀粉水解程度不一，生成的产物也就不同。此外，激活剂、抑制剂也能影响淀粉酶活性，影响淀粉的水解。因此可根据在不同反应条件下，溶液加碘呈现的不同颜色来判断淀粉的水解程度，从而验证了温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。 【器材】 试管（10mm×100mm）、试管架、电热恒温水浴箱、沸水浴、冰浴、多孔白瓷板、滴管。 【试剂】 1.1%淀粉溶液 同实验五 2. 稀碘溶液 称取碘2g，碘化钾4g，溶于1 000蒸馏水中，置棕色试剂瓶中。 3.缓冲液 （1）pH3.0缓冲液 取0.2mol/LNa2HPO4溶液205ml，0.1mol/L柠檬酸溶液795ml，混合后即成。 （2）pH6.8缓冲液 同实验五 （3）pH8.0缓冲液 取0.2mol/LNa2HPO4溶液972ml，0.1mol/L柠檬酸溶液28ml，混合后即成。 4.1%NaCl溶液 称取氯化钠1g，加蒸馏水至100ml即成。 5.1%CuSO4溶液 称取结晶硫酸铜1g，加蒸馏水至100ml。 6.1%Na2SO4溶液 称取硫酸钠1g，加蒸馏水至100ml即成。 7.稀释唾液 同实验三。 　　【操作】 　　1.温度对酶促反应速度的影响 取3支试管，编号，按下表操作： 温度对酶促反应的影响 加入物（滴） 1 2 3 pH6.8缓冲液 20 20 20 1%淀粉溶液 10 10 10 置37℃水浴5分钟 置沸水浴5分钟 置冰水浴5分钟 稀释唾液 5 5 5 置37℃水浴10分钟 置沸水浴10分钟 置冰水浴10分钟 取出，各管加入碘液1滴，摇匀，观察并记录颜色变化。 2.PH对酶促反应速度的影响 取3支试管，编号，按下表操作： pH对酶促反应的影响 加入物（滴） 1 2 3 pH3.0缓冲液 20 － － pH6.8缓冲液 － 20 － pH8.0缓冲液 － － 20 1%淀粉溶液 10 10 10 稀释唾液 5 5 5 摇匀，置37℃水浴保温5~10分钟，向各管各加入1滴碘液，摇匀，观察并记录颜色变化。 激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响 取4支试管，编号，按下表操作： 激活剂和抑制剂对酶活性的影响 加入物（滴） 1 2 3 4 1%淀粉溶液 10 10 10 10 pH6.8缓冲液 20 20 20 20 1% NaCl溶液 － 10 － 1% CuSO4溶液 － － 10 1%Na2SO4 － － － 10 蒸馏水 10 稀释唾液 5 5 5 5 混匀，置37℃水浴中保温5~10分钟 取出，各管加入碘液各1滴，观察并记录颜色变化。 【结果及分析】 观察各管颜色变化，说明温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。 　 【思考题】 1. 何谓最适温度？淀粉酶的最适温度是多少？ 2. 何谓最适pH？淀粉酶的最适pH是多少？ 3．何谓激活剂、抑制剂？淀粉酶的激活剂、抑制剂分别是什么？