生物化学经 典实验——蛋白质含量测定课程设计.pptVIP

实验四、双缩脲法测定蛋白质的浓度;方 法;一、实验目的;　;蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关，因此被广泛地应用。 在一定的实验条件下, 未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应, 并于540－560nm下比色, 可通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。 除－CONH－有此反应外，－CONH2， －CH2－NH2，－CS－NH2等亦有此反应。;三、实验仪器、材料和试剂 ;四、实验操作步骤;（二）? 绘制标准曲线 以每管蛋白的含量为横坐标,其相对应的A520为纵坐标绘制标准曲线。 （三）未知样品蛋白质浓度的测定 取2只试管，每只分别加入1ml稀释的未知样品，再分别加入4ml双缩脲试剂，操作方法同前。 然后，测540nm处光密度值，取其平均值。从绘制的标准曲线查得未知样品的蛋白浓度。 ;五、实验结果