单向辐射状免疫扩散试验SRIDMancini技术-生命科学学院.PPT

免疫技术 * * 生命科学学院 张丽萍教授 下一页 早在一千多年前人们就已经通过临床观察,摸索出了预防某些 瘟疫的方法, 也就是免疫技术的最早形式。近几十年免疫学的研究范围已扩大到生物学的许多方面及临床医学的各个领域，免疫学的研究从宏观走向微观，从细胞水平过渡到分子水平,并且在多方面取得了突破性进展,进入了分子免疫学时代。如今免疫学又有许多重大发展和发现,分支更加多样,产生了基础免疫学﹑临床免疫学和免疫技术三个独立的学科。今天我们就着重学习一下免疫技术。 绪论 下一页 上一页 抗体 定义:抗体又称免疫球蛋白(Ig),是对抗原(引起抗体产生的外来大分子物质)反应而产生的蛋白质。 抗体是免疫系统的重要组成部分,保护动物免遭某些疾病的侵害。人的Ig有5种类型,分别以IgG，IgA，IgM，IgD，IgE表示，其中分别以IgG是脊椎动物体内主要的抗体。 下一页 上一页 IgG的特性和功能 1﹑形状与结构:“Y”形分子,具有两个抗原结合部位。 一﹑特性 下一页 上一页 免疫球蛋白的结构区和功能区: 轻链（light chain,L) 重链（heavy chain,H） 可变区 (variable region,V) 恒定区（constant region,C） 功能区L链可变区（VL）L链恒定区（CL） 铰链区（hinge region)） 下一页 上一页 2﹑专一性 3﹑弹性 4﹑可标记性 二﹑功能 (见右图) 1、与抗原特异性结合 2、激活补体C1q 3、亲细胞性 4、通过胎盘 下一页 上一页 抗体的产生 1﹑多克隆抗体 2﹑单克隆抗体 上一页 凝集反应 定义:当抗体与颗粒状抗原悬浮液(如细胞或胶粒)相互作用时,形成的免疫复合物(见图)产生肉眼可见的团块,称为凝集反应。 用途: ●微生物鉴定 ●乳胶凝集反应(结合抗原) ●乳胶凝集反应(结合抗体) ●血细胞凝集反应 上一页 下一页 免疫扩散测定法 1﹑单向辐射状免疫扩散试验(SRID,Mancini技术) 2﹑双向免疫扩散技术(Ouchterlony技术) 上一页 免疫电泳测定法 免疫电泳测定法将沉淀反应与电泳迁移作用结合起来,是一种清晰度好﹑分辨率高﹑更灵敏﹑更快速的检测方法(如图)。主要的技术有: 1.交换电泳(对流电泳) 该技术中,抗原和抗体分别置于不同的孔中,它们的相向移动是由电势差推动的:大多数抗原向阳极迁移,而IgG向阴极迁移。该法比双向免疫扩散法灵敏度高,15-20分钟即可完毕。 上一页 下一页 2.定量免疫电泳(劳氏火箭免疫电泳) 抗体加到琼脂糖平板中,而抗原放在孔中。利用电压驱使抗原进入凝胶,通常移入正极,而抗体则移向阴极。达到平衡状态后,形成一个具有尖峰的火箭型沉淀线。平衡时每一“火箭”的高度与加到孔中的抗原量成正比。绘制含有已知量抗原的样品的标准曲线,可用来测定待测样品中的抗原含量(见右图) 。 上一页 下一页 放射免疫技术 ? ? ? ? 工作区域 放射活性 抗原或半抗原的Log10对数 放射免疫测定标准曲线示意图 待测抗原竞争力弱,放射性标记配体结合量多。 待测抗原竞争力强,放射性标记配体结合量少。 放射免疫测定法: 这种方法是以放射性标记的抗原(或半抗原)和未标记的抗原之间竞争有限数量抗体上的结合位点为基础的。待测溶液中抗原的量可通过已知量的放射性标记的抗原和固定量的抗体进行测定(如右图) 。 免疫放射分析: 这种技术使用放射性标记的抗体(而不是抗原)来直接测定样品中抗原伙伴抗原的量。 上一页 下一页 酶免疫测定(ELA)技术 该技术也称为酶联免疫吸附试验(ELISA) 。通过把抗体或抗原与某种酶的一个位点相结合(结合后不能影响两者的活性),将抗原—抗体互作的特异性与酶分析的敏感性结合起来。加入一种合适的产色底物,进行酶量测定(见下2页图)。其中主要的技术有: 双抗体夹层酶联免疫吸附试验(double antibody sandwich ELISA) 该方法用于检测特异性抗原,涉及到一个三组分复合物,包括与固体支持物相连的捕获抗体、与捕获抗体结合的抗原和与抗原结合的酶联第二抗体。该方法可以用来检测特殊的抗原或对抗原进行定量分析。 上一页 下一页 上一页 下一页 上一页 下一页 间接酶联免疫吸附试验(indirect ELISA): 该方法用于检测抗体。将 特异性抗原与固体支持物 相连,加入合适的抗体,使之 与抗原结合,漂洗时不被冲 走。结合的抗体用酶联抗 免疫球蛋白进行检测。 上一页 下一页 单向辐射状免疫扩散试验(SRID,Mancini技术) 该技术用于检测用液中的抗原