实验二 凝集反应.pptVIP

Zhang Qiuyu 1.2 现代的抗原抗体反应： 现代抗原抗体反应用标记技术代替传统的肉眼可见反应，其特异性、敏感性均增加，且可以定性、定量甚至定位；缺点是需特殊精密检测仪。 凝集反应的定义及基本类型 血型鉴定的原理 实验材料 载玻片 1块/每人 **用完各自用水冲洗净置消毒缸 三棱针 1根/每人 用后弃垃圾斗 棉签 根/每人（先取再取1) 用后弃垃圾斗 牙签 1根/每人（两端使用） 用后弃垃圾斗 碘伏 生理盐水试管 试管架 标记笔 操作步骤 i． 取血：搓揉左手无名指的指腹——碘伏消毒——用三棱针刺1-2滴血——将无名指的指腹封住盛有盐水的试管管口，用倾倒法将血滴洗入盐水中并混匀形成1%的血球悬液。 ii． 鉴定：取洁净玻片一块，用标记笔在中央划线分区，标明“A”、“B”区——在“A”、“B”区分别滴加抗A、抗B血清各1滴——用毛细吸管吸取待检的血球悬液滴入抗A、抗B血清中，用牙签两端分别拌匀——将玻片平持手中，前后左右转动使之充分混匀，室温放置10-15分钟后观察结果。 注意事项 取血时，注意无菌操作，避免HBsAg的交叉污染（*HBsAg携带者）； 刺血时，尽可能一次性成功，用力适当，让血自然流出或搓揉后流出为佳，勿强行挤压。 鉴定时，滴1滴抗血清及血球悬液即可，多则两边易混；牙签两头不可混用； O型血无凝集现象，无须反复检测。 三、E-花结形成实验 原理 人的外周血T淋巴细胞上特有能与绵羊红细胞结合的受体，称E受体；在一定实验条件下，绵羊红细胞与该受体结合形成以T细胞为中心，四周绕以绵羊红细胞的玫瑰花团，故称E花结实验。 E受体与CD2分子、LFA-2（淋巴细胞功能相关抗原）为同一物质。 * 主讲教师：张秋玉 实验二 凝集反应 基础医学院免疫学院 凝集反应（agglutination) 沉淀反应(precipitation) 补体结合实验 中和实验 免疫酶标技术(eg. ELISA) 免疫荧光技术 放射免疫技术 发光免疫技术 经典反应 现代反应 抗原抗体反应类型 抗原或抗体的检测方法 特殊作用的Ag，如病毒、毒素、激素、酶 中和实验 有补体参与，SRBC和其溶血素组成指示系统 补体结合实验 可溶性Ag， 如血清中免疫球蛋白、补体、αFP、HbsAg等 沉淀反应 颗粒性Ag， 如细菌、RBC、表面结合可溶性Ag的乳胶颗粒等 凝集反应 抗原类型及例子 反应类型 1.1 经典的血清学反应 发光免疫技术 放射免疫技术 免疫荧光技术 免疫酶标技术 名称 ? 发光现微测定仪 发光剂 放射性污染，有半衰期 液闪仪 同位素 ? 荧光显微镜或流式细胞仪 荧光 ? 酶标仪 酶 缺点 检测仪器 标记物 1．直接凝集试验 颗粒性Ag与相应Ab的反应 玻片法：如血型的鉴定、细菌菌种的鉴定 试管法：肥达氏反应 2．间接凝集试验 （可溶性Ag+载体=致敏颗粒）与相应Ab的反应 3．间接凝集抑制试验 可溶性Ag与相应Ab作用后，再与致敏颗粒反应 4. 反相间接凝集试验 （可溶性Ab+载体=致敏颗粒)与相应Ag的反应 试管凝集反应示意图 　　肥达氏反应----用已知伤寒菌的H(鞭毛)和O(菌体)以及甲型(A)与乙型(B)副伤寒沙门氏菌的标准液与病人血清做凝集试验，用于伤寒副伤寒的辅助诊断或用于流行病学调查的免疫凝集实验。 人的红细胞表面有20几种血型抗原系统 ABO血型系统是第一个被描述的红细胞血型系统，由Landsteiner于1901年提出： 无抗原 A和B B A 红细胞上的凝集原（抗原） O AB B A 血型 根据红细胞上所含抗原种类将人类血型分为如下血型： ABO血型系统中有两种抗原，分别称为A抗原和B抗原，均存在于红细胞膜的外表面。 1. 抗原本质：血型抗原是镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白与糖脂，ABO抗原特异性是在H抗原基础上形成的 2. 抗体本质： 血浆中存在两种相应的抗体即抗A抗体和抗B抗体 抗A和抗B 无抗体 抗A 抗B 血清中的凝集素（抗体） 无抗原 A和B B A 红细胞上的凝集原（抗原） O AB B A 血型 ☆ABO血型系统的抗体为天然抗体，主要为IgM，不能通过胎盘。 如果交叉配血试验的两侧都没有凝集反应，为配血相合， 可以进行输血； 如果主侧有凝集反应，则为配血不合，不能输血； 如果主侧不引起凝集反应，而次侧有凝集反应，只能在应急情况下输血，输血时不宜太快太多（300ml），并密切观察，如发生输血反应，应立即停止输注。 + + AB _ + B + _ A _ _ O 抗A血清 抗B血清