酵母菌选育、最适培养基筛选及菌种发酵培养.docVIP

河北师范大学生命科学学院08级生物技术专业 8 - 酵母菌选育、最适培养基筛选及菌种发酵培养 [摘要] 在无菌条件下，用紫外线对酵母菌(yeast)进行不同时长的照射诱变处理，选出合适的诱变菌种进行振荡培养。经振荡培养后的诱变菌种运用正交试验设计的方法采用四个因素三个水平选出最适的菌种培养基，进行进一步的发酵培养。在发酵罐中加入最适培养基成分和合适的酵母菌诱变菌种进行发酵扩培，最终获得大量的菌种和发酵产物。 [关键词] 酵母菌，紫外线，最适培养基，正交试验设计，发酵培养 面包酵母(Saccharomyces cerevisiae)是一种单细胞微生物，是酵母菌的一种,它含蛋白质50％左右，氨基酸含量高，富含B族维生素，还有丰富的酶系和多种经济价值很高的生理活性物质。几千年前人类就用面包酵母发酵面包和酒类，在现代食品工业方面，广泛用作人类主食面包、馒头、包子、饼干糕点等食品的优良发酵剂和营养剂。 本实验选用的物理诱变因子为紫外线，DNA能强烈吸收紫外线，尤其是碱基中的胸腺嘧啶，从而在形成二聚体，改变DNA结构，引起基因突变。本实验的面包酵母菌经不同时长的紫外线诱变处理，培养出的适合的诱变菌种进行最适的菌种培养基的筛选和发酵培养。 最适菌种培养基的筛选是通过正交实验设计进行的。正交试验设计(Orthogonal experimental design)是研究多因素多水平的又一种设计方法，它是根据正交性从全面试验中挑选出部分有代表性的点进行试验，这些有代表性的点具备了“均匀分散，齐整可比”的特点，正交试验设计是分式析因设计的主要方法,是一种高效率、快速、 HYPERLINK /view/20838.htm \t _blank 经济的 HYPERLINK /view/1110073.htm \t _blank 实验设计方法。正交表是一整套规则的设计表格，用 L为正交表的代号，n为试验的次数，t为水平数，c为列数，也就是可能安排最多的因素个数，本实验采用了四因素三水平进行最适培养基的筛选。 选出合适的诱变菌种和适合诱变的酵母菌生长的培养基后，便可以能过发酵罐进行发酵培养，分时段观察记录发酵过程中的PH，溶氧，菌种数。绘制出面包酵母的生长曲线 １　材料与方法 实验材料 菌种： 面包酵母菌 仪器： 高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，光学显微镜，恒温培养摇床，分析天平，小型发酵罐 用品： 枪头及1mL和0.5mL移液器，三角瓶，试管，玻璃涂棒，平皿，血球计数板，酒精灯，棉塞，试管架，盖玻片，记号笔 试剂： 酵母膏，蛋白胨，(NH4)SO4，葡萄糖 PDA培养基，PDA液体培养基（不加琼脂）： 去皮马铃薯 200克、 葡萄糖 20克　、琼脂 20克、自来水1000毫升、 自然PH [其做法是称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸半个小时，纱布过滤，再加10～20g葡萄糖和17～20g琼脂，，高压蒸气（121℃）灭菌20分钟，冷却后贮存备用。] 1.2 试验方法 1.2.1酵母菌选育 制备PDA固体培养基和液体培养基（不加琼脂），将所用用具如玻璃涂棒，9mL无菌水试管，培养皿，斜面试管等包好，121℃，30min 高压蒸汽灭菌。 在超净工作台中，制备固体培养基平板和液体培养基试管，用移液器取1mL菌悬液加入9mL无菌水试管，依次进行浓度梯度稀释，取稀释菌液进行计数，选取合适浓度梯度，进行涂板。 由于固体培养基制备的量不足，实验选取2个浓度梯度，紫外线照射时长选定为50s