1.2 基因工程的基本操作程序.ppt

提纯含目的基 因的表达载体 取出卵细胞 显微注射 受精卵移植入 输卵管或子宫 发育成具新性状的动物 3.2导入动物细胞 显微注射技术 将目的基因导入动物细胞 原核生物繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，故早期常作为受体细胞。 大肠杆菌细胞 用Ca2+处理 感受态细胞 重组表达载体DNA溶于缓冲液 混合 转入 3.3导入微生物细胞 * 新课导入 外星来客？？？ 虎蚕 白斑马 你是否相信？ 普通玉米 有抗虫基因的玉米 1.2 基因工程的 基本操作程序 教学目标 知识目标 简述基因工程的原理和技术 。 1、通过对书中插图、照片等的观察，学会科学的观察方法，培养观察能力。 能力目标 2、通过举一反三，掌握基因工程操作过程，养学生对相关知识的理解能力及良好的语言表达能力。 情感态度与价值观 通过引导学生在网上的探究活动，引导学生主动参与，乐于探究，培养学生收集和处理科学信息的能力、获取新知识的能力、分析和解决问题的能力及交流与合作的能力。 重点 难点 教学重难点 基因工程的基本操作程序的四个步骤 。 从基因文库中获取目的基因。 利用PCR技术扩增目的基因。 基因工程的基本操作程序 一 目的基因的获取 二 基因表达载体的构建 三 将目的基因导入受体细胞 四 目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 将需要的基因从供体 生物细胞内提取出来 即： （1）定义： 目的基因主要是指_______________的基因。 需要转移或改造 （2）常用种类： 目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因（抗病毒、抗细菌)、种子贮藏蛋白的基因、人胰岛素基因、干扰素基因等。 （3）获得目的基因的方法： 1、从基因文库中获取目的基因 2、人工合成的方法 3、利用PCR技术扩增目的基因 1.1什么是基因文库 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，成为基因文库。 1.2基因文库的种类 基因组文库： 部分基因文库(cDNA文库)： 含有一种生物的全部基因 含有一种生物的部分基因 1、从基因文库中获取目的基因 1.3基因文库的构建 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与载体连接 导入受体菌中储存 基因组文库 某种生物的mRNA 单链互补DNA 双链cDNA片段 导入受体菌中储存 与载体连接 cDNA文库 逆转录 构建基因组文库 构建部分基因文库 1.4怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因 根据目的基因的有关信息，如根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA，以及基因的表达产物蛋白质的特性来获取目的基因。 2、人工合成的方法 2.1 反转录法： 目的基因的mRNA 单链DNA (cDNA） 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 2.2 根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 推测 化学合成 推测 3、利用PCR技术扩增目的基因 3.1 PCR技术(聚合酶链式反应)原理： DNA双链复制的基本原理。 3.2 PCR技术反应前提： PCR扩增仪 一段已知目的基因的核苷酸序列，根据这一序列合成引物。 引物？ 一小段单链DNA或RNA，一般20～30个碱基，能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。 四种脱氧核苷酸 一对引物 热稳定DNA聚合酶(Taq酶） DNA的两条链为模板 温度控制和缓冲液 3.2 PCR技术反应条件： 5/ 3/ G—G T—C 3/ 5/ G—A C—C 5/ 3/ 引物Ⅱ G—G 复性 延伸 5/ 3/ A—G 引物Ⅰ 目的基因DNA受热解成单链 变性 引物与单链互补结合 合成链受DNA聚合酶的作用 3.3PCR技术反应过程： 质粒 DNA分子 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA 连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 限制酶 二、基因表达载体的构建 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 （1）重组质粒的形成： 载体的作用：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 （2）基因表达载体的组成： 有人采用总DN