甲基莲心碱对胺碘酮诱导小鼠肺纤维化的保护作用-药理学专业论文.docxVIP

华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 缩略词表 缩写 英文名称 中文名称 AD Amiodarone 胺碘酮 APC BSA Allophycocyanin Bovine serum albumin 别澡红蛋白 牛血清蛋白 DMSO ECM ELISA FBS FITC H-DMEM dimethyl sulphoxide extracellular matrix enzyme linked immunosorbent assay fetal bovine serum fluorescein isothiocyanate high glucose-dulbecco’s modified eagle’s 二甲基亚砜 细胞外基质 酶联免疫吸附测定 胎牛血清 异硫氰酸荧光素 DMED 高糖培养液 medium HE IFN-γ IL-4 LF MPP MTT PBS Hematoxylin-Eosin interferon-γ Interleukin-4 Lung Fibroblasts Matrix metalloproteinase Methyl thiazolyl terazolium Phosphate buffered saline 苏木素-伊红染色 γ-干扰素 白细胞介素-4 肺成纤维细胞 基质金属蛋白酶 甲基噻唑基四唑 磷酸盐缓冲液 SP-D surfactant protein-D 表面活性蛋白-D Th1 Th2 Tregs TGF-β T helper cell 1 T helper cell 2 Regulatory T cells Transforming growth factors-β T 辅助淋巴细胞 1 T 辅助淋巴细胞 2 调节性 T 细胞 转化生长因子-β 中文摘要 第一部分 甲基莲心碱抗胺碘酮诱导的小鼠肺纤维化 目的 研究甲基莲心碱对胺碘酮诱导小鼠肺纤维化的保护作用 方法 实验分五组，control 组、model 组、neferine 组、prednisolone 组、pirfenidone 组。除 control 组于第 1、3、5 天气管内灌注生理盐水外，其它各组于第 1、3、5 天气管内灌注胺碘酮(amiodarone)6.25mg/kg 制备肺纤维化(pulmonary fibrosis) 模 型，从第六天开始，control 组和 model 组给予生理盐水 10 ml/kg，neferine， prednisolone，pirfenidone 组分别给予 nefereine 20mg/kg，prednisolone 15mg/kg， pirfenidone 100mg/kg，口服给药，一天两次。实验期间认真观察动物的精神、活 动、食欲等情况，并且每天在同一时间段记录小鼠体重变化。第 21 天处死小鼠， 取出肺组织，测定肺系数(肺湿重 mg/体重 g)，采用 HE 染色法和 Masson 染色法 观察肺组织病理学变化；氯胺—T 法检测肺组织羟脯氨酸含量；ELISA 法检测血 浆中 Surfactant Protein-D (SP-D)含量；ELISA 法检测血浆中 IL-4、IFN-γ 含量， 衡量 Th1/Th2 平衡；流式细胞术检测外周血 CD4+CD25+Tregs/CD4+细胞比例。 结果 从第 7 天开始，各组小鼠体重缓慢上升，neferine 能明显缓解 amiodarone 引起的小鼠体重减轻。与 control 组比，model 组肺系数和强脯氨酸含量显著增高， 提示造模成功。与 model 组比，neferine 组明显降低肺系数和羟脯氨酸含量。Model 组肺组织切片显示有大量炎性细胞浸润和纤维化病变，neferine、pirfenidone 组 显著改善之。与 model 组比，neferine 组降低 SP-D 含量(23.57±2.14ng/ml vs 44.00±1.80ng/ml，p0.05)，neferine 组升高 IFN-γ，降低 IL-4，调节 Th1/Th2 平 衡。另外， neferine 抑制 model 组 外 周 血 CD4+CD25+Tregs/CD4+ 比例升高 (3.92±0.13% vs 5.26±0.14%，P0.05)。 结论 甲基莲心碱 对 胺 碘 酮 诱 导 小 鼠 肺 纤 维 化 有 保 护 作 用 ， 主 要 通过降低 CD4+CD25+Tregs/CD4+比例，调整 Th1/Th2 平衡，抑制 SP-D 水平。 关键词 甲基莲心碱；胺碘酮；肺纤维化；表面活性蛋白-D；Th1/Th2；CD4+CD25+ 调节性 T 细胞 第二部分 甲基莲